Инфекционная анемия цыплят: Инфекционная анемия цыплят

Содержание

Инфекционная анемия цыплят

Инфекционная анемия цыплят — Chicken Infectious Anemia. Синонимы: «синее крыло», вирусная анемия цыплят (ВАЦ), геморрагический синдром или синдром анемии-дерматита.
Инфекционная анемия цыплят — вирусное заболевание, проявляющееся у цыплят 2-4-недельного (у бройлеров — 14-21-дневного) возраста, протекающее с сильной депрессией, отсутствием аппетита, замедлением роста, резким истощением, часто осложняется вторичными вирусными, бактериальными и грибковыми заболеваниями.

Историческая справка, распространение, экономический ущерб. Вирус анемии цыплят впервые был выделен в 1979 г. в Японии. Спустя 6-8 лет ее стали регистрировать в США, Англии, Германии, Швеции и других странах, в которые возбудитель этой болезни беспрепятственно поступал с племенными яйцами кур новых высокопродуктивных кроссов.
Большой вклад в изучение особенностей вируса внесли ученые Японии — Талигучи и Имей, США — Бокс, Розенберг, Клайд, Англии — Смит, Плейтен, Ньюмен, Германии — Бюлов, Конрад и др.
В настоящее время по экспертным оценкам ИАЦ наносит птицеводству значительный экономический ущерб. Так, эта болезнь лишь американскому бройлерному птицеводству обходится примерно в 50 млн долларов в год. В Великобритании с целью выявления влияния вируса на бройлеров были проанализированы показатели выращивания цыплят на 50 фермах с поголовьем более миллиона голов (25 стад, в которых на момент убоя были выявлены антитела к вирусу ИАЦ, и 25 стад, не имеющих таких антител). Установлено, что стада, не имеющие специфических антител к вирусу ИАЦ, имели лучшую конверсию корма на 2%, большую живую массу на 2,5% и среднесуточные привесы на 13%. Вывод ученых был следующим: субклиническое течение ИАЦ оказывает значительное влияние на продуктивность при выращивании бройлеров.
Возбудитель классифицирован как единственный представитель рода Cyrcovirus семейства Circoviridae. Вирус анемии цыплят — мелкий вирус с диаметром частиц 23-25 нм, ДНК-содержащий, не имеющий оболочки. Однонитчатая кольцевая
ДНК находится в вирусных капсидах. Вирусный капсид состоит из 32 структурных субъединиц. Все известные штаммы вируса принадлежат к одному серотипу.
Вирус анемии цыплят устойчив к ацетону, хлороформу, эфиру и рН 3,0. Вирус частично инактивируется после прогревания при 80°С в течение 30 мин и полностью погибает после 10-минутного кипячения.
Для изоляции и культивирования вируса используют культуры лимфобластоидных клеток (MDCC-NSB1, MDCC-JP2, MDCC-CU 147), суточных СПФ-цыплят и 6-дневные куриные СПФ-эмбрионы.
Эпизоотологические данные. Восприимчивы к заболеванию только цыплята, чаще цыплята-бройлеры. Птица других видов устойчива к вирусной анемии, хотя есть сообщения об обнаружении антител к возбудителю у японских перепелов.
Инфекция распространяется вертикально — от инфицированных кур потомству и горизонтально — при контакте особей или через корм. Вертикальная передача происходит в течение 3-9 недель. Инкубационный период составляет 10-12 дней, пик проявления клинических признаков приходится на период с 17-го по 24-й день. При высокой степени инфицирования стада может наблюдаться второй пик отхода цыплят в возрасте 30-34 дней. Установлены случаи заражения потомства через сперму инфицированных петухов.
Для горизонтального распространения вируса в восприимчивом племенном стаде обычно достаточно 3-6 недель. Чаще поражаются 3-недельные и более старшего возраста цыплята вследствие исчезновения у них материнских антител. При горизонтальном инфицировании цыплят вирусная анемия может клинически не проявляться, но осложняет течение других болезней из-за иммунодепрессии.
Экспериментально показана возможность заражения цыплят через респираторный тракт.
Установлено, что первые вспышки инфекционной анемии в Японии и Германии совпали с иммунизацией птицы вакциной против болезни Марека, предварительно контаминированной вирусом инфекционной анемии. Цыплята, инфицированные вирусом инфекционной анемии цыплят и вирусом болезни Марека, вирусом инфекционной бурсальной болезни, лентогенным вирусом ньюкаслской болезни, вирусом ретикулоэндотелиоза, аденовирусом или реовирусом, могут проявлять симптомы болезни, ассоциированные с признаками сопутствующих инфекций.
Патогенез инфекционной анемии был изучен Suasa et al. в 1979 г. У цыплят первого возраста вирус анемии цыплят вызывает анемию с деструкцией эритробластоидных клеток и иммунодефицит.
Вскоре после заражения белок вируса инфекционной анемии — аноптин (VP3) — мелкий белок, состоящий из 121 аминокислоты, реагирует с клеточным хроматином миелоидных клеток и лимфобластоидных Т-клеток. В клетках обнаруживаются морфологические изменения. Клетки сморщиваются, их хроматин разрушается до аминонуклеосомальных фрагментов и конденсируется, что характерно для физиологического процесса программированной клеточной гибели или опоптоза.
Клинические симптомы. Заболевание проявляется в двух формах: клинической и субклинической. Клиническое проявление заболевания у цыплят начинается на 10-14-й день их жизни снижением прироста живой массы и поедаемости корма, вялостью, анемичностью слизистых оболочек, взъерошенностью оперения, гангренозными дерматитами. Очаговые поражения кожи развиваются в области головы (подчелюстное пространство), крыльев, грудной клетки, живота, бедер и голеней. Из трещин кожи сочится, а нередко капает кровянисто-серозный экссудат. Дерматиты развиваются при обсеменении очагов поражения секундарной микрофлорой. Венозные сосуды крыльев переполнены, вследствие чего заболевание еще называют болезнью «синего крыла».
Кровь водянистая, образование кровяного сгустка происходит с задержкой. Отмечается снижение гематокрита в пределах 6-27% при норме 43% вследствие поражения гемацитобластов, приводящего к уменьшению количества эритроцитов до 1 млн при норме 4,5 млн/мм3.
Смерть наступает в течение нескольких дней после проявления клинических признаков. Отход цыплят составляет при стертых клинических признаках от 5% до 15%, а в острых случаях — до 50-60%. Куры могут переболевать в период начала яйцекладки в легкой форме без снижения продуктивности.
Субклиническая форма болезни может вообще не приносить хлопот, но способна, тем не менее, осложнить течение других болезней из-за иммуносупрессии. Установлено, что при инфекционной анемии уменьшается продуцирование антиген-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов для вирусов болезни Марека и ретикулоэндотелиоза у цыплят, зараженных анемией в возрасте старше 3 недель, и, таким образом, угнетает поствакцинальный иммунный ответ и задерживает выздоровление молодняка от инфекционных болезней.
Патологоанатомические изменения. При патологоанато-мическом вскрытии павшей или больной птицы отмечают общую бледность тканей, атрофию и изменение костного мозга от бледного до желтого, атрофию тимуса и бурсы. Печень увеличена и имеет желтоватый оттенок. Кровоизлияния на коже, особенно на плечевых и локтевых суставах, а также на грудных и бедренных мышцах, застойные явления в сосудах крыльев.
Гистологические изменения. Характерные для этой болезни изменения появляются уже на 6-й день в костном мозге и тимусе, несколько позднее — в клоакальной сумке, селезенке и печени.
На ранней стадии заболевания в гемопоэтических клетках удается установить нарушение плазменной мембраны, вакуолизацию, появление внутриядерных включений в виде тонких гомогенных гранул. В пораженных клетках обнаруживают конгломераты вирусоподобных частиц. Незрелые клетки находят, правда нечасто, на 12-й день после заражения.
Иммунитет. У переболевшей птицы через 3-6 недель вырабатываются антитела, которые передаются потомству. Материнские антитела обеспечивают полную защиту потомства от заболевания и циркулируют у цыплят около 3 недель.
Диагноз. Предварительный диагноз может быть поставлен на основании эпизоотологического анализа, клинических признаков и патоморфологических изменений.
Окончательный диагноз ставят на основании лабораторных исследований.
Разработан метод выделения возбудителя на культурах клеток MDCC-MB-1, полученных из лимфомы БМ. Считают, что вирус появляется на 3-м пассаже. Он репродуцируется в куриных эмбрионах, но не вызывает их гибели и патологоанатомических изменений в них. С целью выделения вируса инфекционной анемии кур эффективно применять внутрибрюшинное заражение однодневных СПФ-цыплят.
Для серологических исследований сыворотки крови птицы используют реакцию нейтрализации, непрямой флюоресценции и метод твердофазного иммуноферментного анализа (Elisa-тест).
Вирусная ДНК может быть обнаружена с помощью ПЦР в ткани гонад и селезенки даже у кур, серопозитивных в течение более 40 недель.
Дифференциальный диагноз. Вирусную анемию цыплят необходимо дифференцировать от железодефицитной анемии, авитаминоза К, инфекционной бурсальной болезни.
Железодефицитная анемия у птиц встречается сравнительно редко. В правильности поставленного диагноза можно убедиться только по результатам проведенных терапевтических мероприятий, включающих введение в корм больших доз препаратов железа. Обычно 3-4-дневный курс снимает эту проблему.
Авитаминоз К. Часто бывает нарушена система свертывания крови. При патологоанатомическом вскрытии обнаруживают несвернувшуюся кровь светло-красного цвета. Все органы и ткани равномерно бледнее, чем в норме. Улучшение качества кормления, введение в рацион травяной муки и назначение препаратов витамина К (викасол или синковит) нормализуют обменные процессы в организме птицы.
Инфекционная бурсальная болезнь. Патологоанатомические изменения в организме птиц зависят от вирулентности эпизоотического штамма вируса ИББ.
Действие «горячего» штамма ИББ у 30-40-дневных цыплят вызывает характерные патологоанатомические изменения: мраморные почки, множественные кровоизлияния в мышцах, иногда и в миокарде, огромные воспаленные (или уже атрофированные) бурсы, изменения в желудочно-кишечном тракте.
Однако такой картины мы не отмечаем, если инфекция вызвана штаммом ИББ умеренной вирулентности или поствакцинальными осложнениями после применения не очень качественной вакцины. В этом случае учитывают изменения в костном мозге и тимусе.
Лечение и профилактика. Эффективных методов лечения этой болезни до сих пор не найдено. Сократить падеж птицы помогают добавки в корм или выпаивание витаминов (например, аминовитал в дозе 3 мл на 100 л. воды или 500 мл на 1 т корма) с обязательной проверкой чувствительности циркулирующих в хозяйстве микроорганизмов, вызывающих эти заболевания. Положительный эффект дает внесение в питьевую воду подкислителей (аскорбиновая или лимонная кислота, селацид и др.).
Необходимо выполнение различных зоогигиенических процедур, особенно тщательное очищение помещений от помета и надлежащая влажная и аэрозольная дезинфекция с применением формалина в дозе 30-40 мл на 1 м3 воздуха, а также строгое соблюдение технологических требований.
Санитарные меры играют исключительно большую роль в предотвращении заноса возбудителя извне и распространения в хозяйстве. Однако полное уничтожение вируса инфекционной анемии цыплят практически невозможно из-за высокой его устойчивости к дезинфицирующим веществам. Английские специалисты рекомендуют использовать виркон С из расчета 1:250 для выпаивания с водой.
Специфическая профилактика. В настоящее время Германия, Нидерланды, Франция производят живые вакцины против этой болезни (например, Нобилис CAV). Вакцинируют птицу прародительских и родительских стад яичных кроссов в 13-15-недельном возрасте, мясных — в 17-20 недель, то есть за месяц до начала яйцекладки и сбора яиц на инкубацию. Вакцину вводят однократно через питьевую воду или уколом в перепонку крыла.

8.12. Инфекционная анемия цыплят

Инфекционная
анемия цыплят 
(англ.
— Infections chicken anemia; вирусная анемия цыплят,
«синее крыло») — заболевание молодняка
раннего возраста, протекающее с поражением
костного мозга, иммунодефицитом и
заканчивающееся дерматитами,
гидроперикардитом и водянкой брюшной
ПОЛОСТИ.

Историческая
справка, р
аспространение,
степень опаснос
ти
и ущерб. 
Впервые
возбудитель был выделен в 1979 г. в Японии,
а затем в 1983 г. в Европе в птицеводческих
хозяйствах при выращивании бройлеров.
Эпизоотологическая и экономическая
опасность болезни заключается в том,
что она регистрируется во всех бройлерных
птицехозяйствах, сопровождается
повышенной смертностью (5…10 %, а в
отдельных хозяйствах до 60 %).

Возбудитель
болезни. 
Возбудитель
инфекционной анемии цыплят представляет
собой мелкий (23…25 нм) однонитчатый
ДНК-содержащий вирус. По последним
данным, его относят к семейству
Circoviridae. Вирус хорошо культивируется в
развивающихся куриных эмбрионах,
СПФ-цыплятах и культуре клеток.

Вирус
устойчив к ацетону, хлороформу, спирту
и кислой среде (рН 3,0), погибает при 80 °С
в течение 30 мин, 100 °С — за 10 мин.
Дезинфицирующие препараты в общепринятой
концентрации быстро инакти-вируют его.

Эпизоотология.
К 
инфекции
более всего чувствительна птица мясного
направления, особенно бройлеры, что,
вероятно, связано с интенсивным ростом.
Болезнь чаще наблюдается у цыплят в
возрасте 14…21 день, причем цыплята
младшего возраста, как правило, не
болеют, так как у них развитие инфекции
предупреждают материнские антитела.

Инфекция
у бройлеров обычно носит субклинический
характер. Тем не менее и
клиническая, и субклиническая
формы оказывают иммуносуп-рессивное
влияние на организм (подавляют иммунитет),
что может стать причиной больших потерь.

37*

579При
этом у цыплят в неблагополучных хозяйствах
четко выражена чувствительность к
заражению вирусом — после 3-недельного
возраста они уже устойчивы. Птица, не
имевшая контакта с вирусом, чувствительна
к нему в любом возрасте. Вертикальный
путь передачи отмечается, как правило,
в тех хозяйствах, в которые завозят
инкубационное яйцо из неблагополучных
пунктов.

В
естественных условиях инфекция
распространяется контактным способом
у цыплят раннего возраста либо посредством
вакцинации их против болезни Марека в
суточном возрасте. При этом вирус может
быть как интегрирован в геном цыпленка,
так и находиться непосредственно в
вакцине. Последний путь распространения
инфекции представляет для промышленного
птицеводства наибольшую опасность,
если для производства вакцин используют
куриные эмбрионы, полученные из
коммерческих хозяйств.

Патогенез. Патогенез
заболевания связан с инфицированием
интра- и экстрасинусоидальных
гемоцитобластов и ретикулярных клеток
в костном мозге и корковом слое тимуса.
После заражения быстро развивается
анемический синдром; цыплята отстают
в росте, возникают апластическая анемия
и атрофия лимфоидных органов. Красный
костный мозг замещается жировой тканью,
атрофируются зобная железа, фабрициева
сумка.

Течение
и клиническое проявление. 
Клинически
заболевание проявляется у цыплят
lO…H-дневного возраста снижением прироста
живой массы и поедаемости корма, вялостью,
анемичностью слизистых оболочек,
взъе-рошенностью пера, гангренозными
дерматитами. Венозные сосуды крыльев
переполнены кровью, вследствие чего
заболевание еще называют болезнью
«синего крыла». Этот клинический признак
возникает в результате как самостоятельного
действия возбудителя, так и развития
бактериальной инфекции, вызванной в
первую очередь стафилококком, колибактерией
и клостридиями. Смерть наступает в
течение нескольких дней после появления
клинических признаков. Отход цыплят
составляет при стертой клинической
картине от 5 до 15 %, а в острых случаях
—до 50…60 %. Куры могут переболеть в период
начала яйцекладки в легкой форме без
снижения продуктивности.

Патологоанатомические
признаки. 
При
патологоанатомическом вскрытии павшей
или больной птицы макроскопически
отмечают атрофию тимуса и бурсы,
увеличение и обесцвечивание печени,
застойные явления в сосудах крыльев.

Кожа,
особенно на крыльях, вследствие геморрагии
синеет (отсюда одно из названий болезни),
теряет эластичность, через нее на
поверхность выделяется экссудат. Такая
кожа легко повреждается и становится
своеобразными воротами для вторичной
микробной инфекции, приводящей к
гангренозному дерматиту.

Иногда
в особо тяжелых случаях на вскрытии
находят гидроперикар-дит, асцит.
Транссудат выходит в сердечную сумку
(до 5 мл), и это основной признак у погибшего
молодняка. В полости сердечной сорочки
можно обнаружить фибринозные наложения.
Наиболее тяжелая форма сопровождается
подкожной отечностью. Сердце увеличено
в объеме и расширено.

При
гистологических исследованиях в печени
находят экстенсивные некрозы с
фибринозными наложениями, жировой
дегенерацией и отложением капелек жира
в клетках, лимфоидно-клеточную инфильтрацию
перипортального поля, гиперплазию
желчных ходов, пролиферацию и выраженный
цирроз. В сердечной мышце обнаруживают
кровоизлияния.

580Диагностика
и дифференциальная диагностика. 
Диагностику
заболевания проводят по данным
эпизоотологического анализа, результатам
определения антител к вирусу анемии
цыплят в основном в непрямой РИФ, ИФА,
а также путем выделения вируса на
чувствительных к нему СПФ-эмбрионах и
цыплятах.

Возможна
диагностика болезни на основании
исследования крови больных цыплят на
12… 16-й день после начала заболевания —
при этом гематокрит снижен до 11…20 % при
норме 30…40 %. Это простой, но специфичный
способ лабораторной диагностики анемии
цыплят, так как другие вирусные агенты
не вызывают подобных изменений крови.

При
дифференциальной диагностике на
инфекционную анемию цыплят в первую
очередь надо исключить инфекционную
бурсальную болезнь, стафилококкоз,
гиповитаминоз К, отравление мико-токсинами.

Иммунитет,
специфическая профилактика. 
Для
специфической профилактики болезни за
рубежом применяют вакцины «Тимовак»
(Германия), «Calnek» (используют три метода
аппликации вакцины: перорально,
выпаиванием с питьевой водой, введением
в подкрыльцовую перепонку). Ведутся
разработки рекомбинантных вакцин на
основе протеинов вируса анемии цыплят.

Профилактика. Профилактика
инфекционной анемии цыплят основывается
на строгом соблюдении технологии по
выращиванию бройлеров изолированно от
взрослого ПОГОЛОВЬЯ.

Бройлеров
необходимо выращивать с соблюдением
плотности посадки (не больше 14 голов на
1 м2 площади пола), при выращивании в
клетках плотность посадки регулируется
паспортными данными на клеточное
оборудование. Необходимо обеспечить
высокий уровень неспецифических антител
у цыплят в первые недели выращивания;
исключить из рациона корма, пораженные
микотоксинами.

При
проектировании хозяйств важно не
допустить размещения на одной территории
инкубатория цыплят раннего возраста и
взрослой птицы, которая инфицирована
вирусом анемии. Особо тщательно нужно
дезинфицировать инкубационные яйца,
на поверхности которых может находиться
вирус. Применяют общепринятые меры по
подготовке, очистке и дезинфекции
помещений, в которых содержится птица.

Меры
борьбы. 
Меры
борьбы с заболеванием состоят из
организационно-хозяйственных,
ветеринарно-санитарных мероприятий и
специфической профилактики болезни.

Контрольные
вопросы и задания. 
1.
Дайте общее определение болезни,
характеристику возбудителя. 2. Назовите
способы заражения цыплят, особенности
возрастной восприимчивости. 3. Каковы
наиболее характерные патологоанатомические
изменения, обнаруживаемые при вскрытии
трупа? 4. Перечислите ограничительные
мероприятия в неблагополучных хозяйствах.
5. Каковы специфическая иммунопрофилактика,
сроки вакцинации?

Патологоанатомические изменения при инфекционной анемии у цыплят и куриных эмбрионов Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

в рационе животных. Концентрация общего, белковосвязанного и неорганического йода в крови значительно повышается в процессе супо-росности, а к концу периода лактации снижается почти до уровня холостых свинок. Содержание общего йода в цельной крови выше, чем в плазме, в 1,5 раза. Между этими показателями существует тесная корреляционная связь (г=0,73). СБИ составляет 60 % от общего йода, причем эти два показателя слабо коррелировали между собой (г=0,34). Уровень йода в крови плодов существенно выше, чем у их матерей.

ЛИТЕРАТУРА

1. Микроэлементозы человека / А. П. Авцын, А. А. Жаворонков, М. А. Риш, Л. С. Строч-кова. — М.: Медицина, 1991. — 495 с.

2. Г е о р г и е в с к и й, В. И. Минеральное питание животных / В. И. Георгиевский, Б. Н. Анненков, В. Т. Самохин. — М.: Колос, 1979. — 471 с.

3. Г р о м о в а, Е. В. Метаболизм йода у свиней в онтогенезе / Е. В. Громова, С. Г. Кузнецов. — Саранск: Мордовское книжное издательство, 2003. — 297 с.

4. Г р о м о в а, Е. В. Функциональная активность щитовидной железы у свиней с различной обеспеченностью йодом / Е. В. Громова, К. Н. Лобанов // Научно-практические аспекты развития животноводства в современных условиях аграрного производства. — Мичуринск-наукоград РФ, 2013. — С. 192-195.

5. Г р о м о в а, Е. В. Влияние йода на морфологические и биохимические показатели крови свиней / Е. В. Громова, К. Н. Лобанов // Научно-практические аспекты развития животноводства в современных условиях аграрного производства. — Мичуринск-наукоград РФ, 2013. — С. 151-155.

6. К о к о р е в, В. А. Биологическое обоснование потребности супоросных свиноматок в микроэлементах / В. А. Кокорев. — Саранск: изд-во Саратовск. ун-та. Саран, фил., 1990. — 172 с.

УДК 636.5:611.36:619:616.98

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ У ЦЫПЛЯТ И КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ

И. Н. ГРОМОВ, Д. О. ЖУРОВ, М. К. СЕЛИХАНОВА УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, ул. Доватора, 7/11, Республика Беларусь, 210026

А. С. АЛИЕВ, С. А. ЕМЕЛЬЯНОВА, М. В. БУРЛАКОВ ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5, Российская Федерация, 196084

(Поступила в редакцию 22.01.2014)

Введение. В имеющихся изданиях крайне скудно освещены аспекты патологоанатомической диагностики новых и малоизученных бо-

лезней птиц, к которым можно отнести инфекционную анемию. Болезнь впервые была зарегистрирована в Японии в 1979 году. В настоящее время вспышки инфекционной анемии регистрируются во многих странах с развитым птицеводством [1, 2]. Результаты исследований В. А. Лобанова и др. [4] свидетельствуют о широком распространении вируса инфекционной анемии цыплят в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации, Украины и Республики Беларусь. В крупных птицеводческих хозяйствах промышленного типа инфекционная анемия наносит значительный экономический ущерб, который обусловлен гибелью птицы, низкими приростами и оплатой корма, снижением категорийности тушек, повышенной выбраковкой [3].

В отечественной и зарубежной литературе имеется недостаточное количество сведений, посвященных изучению патоморфологических изменений во внутренних органах куриных эмбрионов и цыплят при экспериментальном течении болезни. Патоморфологические данные охватывают незначительный срок наблюдения. Многие аспекты указанных проблем носят противоречивый характер и требуют более детального изучения.

Установлено, что вирус ИАЦ передается горизонтально и вертикально. При этом вертикальный способ передачи вируса через инкубационное яйцо принято считать основным источником распространения возбудителя. Источником вертикальной трансмиссии инфекции может служить сперма больных петухов. При наличии антител у 80 % кур-несушек в стаде процент неинфицированного потомства может составить до 20. Следует отметить, что патоморфологические изменения у куриных эмбрионов, развивающиеся при заражении вирусом ИАЦ, остаются неизученными. Решение данной проблемы позволит значительно повысить достоверность, упростить и ускорить сроки постановки патологоанатомического диагноза на инфекционную анемию.

Цель работы — изучить патологоанатомические изменения у куриных эмбрионов и цыплят при экспериментальном заражении их вирусом инфекционной анемии.

Материал и методика исследований. Исследования по изучению экспериментальной цирковирусной инфекции были проведены на СПФ-эмбрионах и цыплятах суточного возраста. Эмбрионы были подобраны по принципу аналогов и разделены на 2 группы, по 10 эмбрионов в каждой. Цыплята также были подобраны по принципу аналогов и разделены на 2 группы, по 16 цыплят в каждой. Эмбрионов опытной группы в суточном возрасте заражали изолятом «Краснодарский» («АБИМ») вируса ИАЦ (депонирован в Государственной кол-

лекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского под № 2722) в суточном возрасте в желточный мешок. Вируссодержащим материалом служил стерильный 20%-ный гомогенат печени экспериментально зараженных вирусом ИАЦ СПФ-цыплят, обработанный по общепринятой методике.

Цыплят опытной группы в суточном возрасте внутримышечно заражали тем же штаммом («Краснодарский») вируса инфекционной анемии. Интактные СПФ-цыплята и эмбрионы 2 группы служили контролем. За всеми цыплятами и эмбрионами было установлено клиническое наблюдение. На 19 день после заражения эмбрионы 1 и 2 групп охлаждали при 1=4 °С в течение 12 часов.

На 4, 8, 15, 21 сутки СПФ-цыплят опытной и контрольной групп убивали с последующим отбором тимуса. Проводили наружный осмотр зараженных и интактных цыплят и эмбрионов (в том числе плодных оболочек) с последующей их аутопсией. При изучении и описании анатомических полостей, трубчатых и компактных органов использовали схемы, общепринятые в патологической анатомии. На основании анализа данных патологоанатомического вскрытия был поставлен патологический диагноз.

Материалом для изучения спонтанной цирковирусной инфекции служили трупы цыплят 8-30-дневного возраста. Патологический материал был доставлен с диагностической целью в ФГОУ ВПО СПбГАВМ и УО ВГАВМ из птицефабрик мясного направления, цыплята которых были привиты живой вакциной против ИАЦ.

Результаты исследований и их обсуждение. При патологоанато-мическом вскрытии зараженных эмбрионов отмечалась гиперемия зародышевых оболочек, их помутнение и инъекция кровеносных сосудов. Отмечались также признаки омфалита и омфалофлебита: выраженная гиперемия и отечность тканей, наличие в венах тромбов темно-красного цвета. У эмбрионов контрольной группы зародышевые оболочки были полупрозрачными, серо-розового цвета, без признаков гиперемии и отека.

На большей площади кожи, ее производных и скелетных мышцах выявляли признаки анемии. Ткани же у основания клюва, в области век и шеи выглядели цианотичными.

Подкожная клетчатка в области головы и век была набухшая, студневидная, блестящая, полупрозрачная, при разрезе стекают капельки прозрачного транссудата.

Сердце увеличено в размере, пери- и эпикард слегка набухшие, влажные, блестящие, коронарные сосуды гиперемированы. В полостях

сердца — несвернувшаяся кровь. В одних случаях сердце принимало мешкообразную форму. При этом миокард был бледным. В области венечной борозды выраженная гиперемия, имеются единичные кровоизлияния. В других случаях отмечалась выраженная синюшность сердечной мышцы с наличием в полости сердечной сорочки темно-красного транссудата. Печень увеличена в размере, отечная, дряблой консистенции, цвет пестрый: чередуются темно-красные и светло-желтые участки; рисунок долек на разрезе не различим. У интактных эмбрионов печень была без структурных изменений: не увеличена в размере, упругой консистенции, темно-коричневого цвета, рисунок дольчатого строения, на разрезе не выражен.

Тимус резко уменьшен в объеме (рис. 1, 2), плотной консистенции, серого цвета, рисунок дольчатого строения, на разрезе нечеткий. У отдельных эмбрионов отмечалось не только недоразвитие, но и полное отсутствие отдельных долек. При макроскопическом исследовании тимуса эмбрионов контрольной группы существенных морфологических изменений выявлено не было. Дольки органа располагались в перитрахеаль-ной клетчатке, имели нормальную величину и форму, серо-розовый цвет, рисунок дольчатого строения, на разрезе четкий.

Патологоанатомический диагноз ИАЦу куриных эмбрионов:

1. Выраженный инфантилизм тимуса.

2. Острое расширение сердца, гиперемия коронарных сосудов, кровоизлияния в перикарде. Гидроперикардиум.

Рис. 1. Макровид интактного эмбриона

Рис. 2. Макровид эмбрионаопытной группы

3. Острая венозная гиперемия зародышевых оболочек, коронарных сосудов, миокарда, мягких тканей в области шеи, у основания клюва и в области век.

4. Серозный отек соединительнотканной клетчатки.

Нами также установлено, что спонтанное и экспериментальное заражение цыплят цирковирусом определяет в целом сходный характер морфологических изменений в органах и тканях цыплят. При этом ведущие патологические процессы также развиваются в центральных органах кроветворения и иммуногенеза, сердечно-сосудистой системе и коже.

В костном мозге больных цыплят преобладают явления аплазии и ожирения (рис. 3). Они легко устанавливаются при продольном разрезе трубчатых костей, например бедренной или плюснево-заплюсневой. При аплазии костного мозга цвет последнего изменяется с темно-красного (норма) до серого, консистенция становится студневидной. При ожирении кроветворной ткани на разрезе кости выявляется светло-желтая полужидкая масса, напоминающая подсолнечное масло.

Следует отметить, что глубина поражений костного мозга была неодинаковой. Поэтому для учета степени патогенности вируса ИАЦ нами разработана 3-балльная система оценки морфологических изменений в костном мозге цыплят.

0 баллов («-«) — нет изменений. На продольном разрезе трубчатой кости (бедренной, большеберцовой) красный костный мозг равномерно распределен в эпифизах и диафизе. Желтый костный мозг не выявляется.

1 балл («+») — слабо выраженные изменения. На продольном разрезе трубчатой кости (бедренной, большеберцовой) красный костный мозг локализуется преимущественно в эпифизах. В диафизе выявляется преимущественно желтый костный мозг. Удельный объем красного костного мозга больше, чем желтого.

2 балла («++») — умеренные изменения — на продольном разрезе трубчатой кости (бедренной, большеберцовой) красный костный мозг локализуется преимущественно в эпифизах. Здесь же выявляются участки с ожирением. В диафизе выявляется только желтый костный мозг. Удельный объем желтого костного мозга больше, чем красного.

3 балла («+++») — выраженные изменения — на продольном разрезе трубчатой кости (бедренной, большеберцовой) полноценный красный костный мозг не выявляется. В эпифизах и диафизе присутствует только желтый костный мозг.

Дольки тимуса зараженных цыплят подвергались выраженной атрофии (линейные размеры и масса уменьшаются в несколько раз) и замещались жировой тканью (рис. 4, 5, 6). При этом установлено, что глубина поражений тимуса цыплят также была неодинаковой. Поэтому для учета степени патогенности вируса ИАЦ нами предложена 3-балльная система оценки морфологических изменений в тимусе:

0 баллов («-«) — нет изменений. Признаки атрофии долек и их ожирения не выражены.

1 балл («+») — слабо выраженные явления ожирения и атрофии долек. Объем долек тимуса заметно превышает объем окружающей жировой ткани.

2 балла («++») — явления атрофии и липидоза долек носят умеренный характер. При этом удельный объем жировой клетчатки не превышает удельный объем паренхимы долек.

3 балла («+++») — выраженные признаки склеротизации и ожирения долек. Объем жировой ткани визуально заметно больше, чем удельный объем паренхимы долек.

При изучении клоакальной бурсы и селезенки зараженных птиц отмечались слабовыраженные признаки атрофии. Кроме того, при па-тологоанатомическом вскрытии павших и вынужденно убитых цыплят отмечались точечные, пятнистые и полосчатые кровоизлияния в пере-мизии мышц грудины и шеи.

Рис. 3. Макрофото. Ожирение и аплазия костного мозга 15-дневного цыпленка опытной группы

Рис. 4. Макрофото. Атрофия тимуса у цыпленка опытной группы на 15 день после заражения вирусом ИАЦ

Рис. 5. Макрофото. Тимус 15-дневного цыпленка контрольной группы без структурных изменений

Рис. 6. Макрофото. Уменьшение линейных размеров тимуса у 21-дневного цыпленка опытной группы (слева) по сравнению с контролем (справа)

При наружном и внутреннем осмотре трупов выявлялись признаки малокровия. При этом кровь становилась жидкой, светло-красного цвета, плохо свертывалась. Явления гидремии четко коррелировали с гематологическими изменениями.

На фоне общей анемии практически во всех случаях развивались тяжелые расстройства гемодинамики в системе кожного покрова. Иногда наблюдались явления патоморфоза. Так, при спонтанной циркови-русной инфекции застойная гиперемия охватывала не только медиальные участки крыльев («синее крыло»), но и область грудных мышц, брюшной стенки и тазовых конечностей.

Кожа в этих участках, особенно в области брюшной стенки и грудины, приобретала темно-красный цвет, подсыхала, резко истончалась, легко разрывалась («сгорала»). При осложнении болезни бактериальными инфекциями в коже голени и пальцев появлялись глубокие некрозы и сухая гангрена (гангренозный дерматит).

Патологоанатомический диагноз классической формы ИАЦ у цыплят:

1. Общая анемия.

2. Аплазия и ожирение костного мозга.

3. Атрофия и липоматоз тимуса.

4. Гидремия.

5. Кровоизлияния в мышцах и слизистой оболочке железистого желудка.

6. Острая венозная гиперемия кожи в области крыльев («синее крыло»), грудины и ног.

7. Серозные, серозно-геморрагические отеки и кровоизлияния в подкожной клетчатке крыльев, грудины и коленного сустава.

8. Некрозы кожи в области головы, ног и крыльев (при осложнении условно-патогенной микрофлорой).

9. Зернистая дистрофия печени, милиарные очаги некроза в ней.

Следует отметить, что характерные морфологические признаки могут отмечаться только при классическом течении инфекционной анемии, которые наблюдаются у цыплят раннего (1-14-дневного) возраста, не имеющих родительских антител к вирусу ИАЦ. В настоящее время практически во всех странах мира проводится вакцинация родительского поголовья против ИАЦ с целью создания напряженного трансовариального иммунитета у цыплят раннего возраста. На этом фоне у вакцинированных цыплят 20-30-дневного возраста очень часто регистрируется латентное течение ИАЦ. При этом характерные патоло-гоанатомические и гистологические изменения не выявляются. Кроме того, ИАЦ очень часто протекает в ассоциации с другими вирусными инфекциями с развитием тяжелого комбинированного иммунодефицита. В таких случаях доминируют морфологические признаки осложняющих болезней — ИББ, реовирусной и пневмовирусной инфекций.

Патологоанатомический диагноз при латентном течении ИАЦ с наслоением в 20-30-дневном возрасте ИББ:

1. Выраженная атрофия, склероз и кистоз фабрициевой бурсы.

2. Атрофия, склероз и липоматоз тимуса.

3. Атрофия селезенки, железы Гардера и слепокишечных миндалин.

4. Острая венозная гиперемия кожи в области крыльев грудины и ног.

5. Серозные, серозно-геморрагические отеки и кровоизлияния в подкожной клетчатке крыльев, грудины и коленного сустава.

6. Зернистая дистрофия печени, милиарные очаги некроза в ней и селезенке.

7. Истощение, отставание в росте.

8. Неизмененный костный мозг, нет признаков анемии и гидремии.

Патологоанатомический диагноз ассоциативного течения ИАЦ

и реовирусной инфекции:

1. Серозно-геморрагический тендовагинит сухожилий пальцевых сгибателей.

2. Серозно-гнойное, гнойно-фибринозное воспаление плюсневых суставов.

3. Некроз эпифиза бедренной кости.

4. Острое катаральное воспаление слизистой оболочки 12-перстной и тощей кишок с наличием точечных и диффузных кровоизлияний.

5. Атрофия тимуса и фабрициевой бурсы.

6. Утолщение мякишей пальцев с наличием некрозов.

7. Серозно-геморрагический отек подкожной клетчатки в паховой области.

8. Кровоизлияния в бедреных и грудных мышцах и в коже.

9. Гематомы в области плюснево-заплюсневого сустава

10. Алопеции в области грудины, живота и спины.

11. Общая венозная гиперемия.

12. Постовариальная гипотрофия.

Патологоанатомический диагноз ассоциативного течения ИАЦ и пневмовирусной инфекции:

1. Цианоз кожи (у всех) и серозный отек подкожной клетчатки (у отдельных цыплят) в области грудины.

2. Точечные, полосчатые и диффузные кровоизлияния в области грудных, бедренных мышц.

3. Венозная гиперемия и атрофия тимуса.

4. Атрофия тимуса и фабрициевой бурсы.

5. Острый катаральный ринит, трахеит.

Заключение. Таким образом, экспериментальное и спонтанное заражение цыплят вирусом инфекционной анемии приводит к развитию у них тяжелых патологоанатомических изменений со стороны сердечно-сосудистой и иммунной систем. При этом наиболее выраженные и патогномоничные изменения развиваются в тимусе и костном мозге. На основании полученных результатов исследований нами предложена 3-балльная система оценки морфологических изменений в костном мозге и тимусе, использование которой позволяет определить степень патогенности вируса ИАЦ. При экспериментальном заражении СПФ-куриных эмбрионов вирусом ИАЦ в их организме развиваются сходные патологоанатомические изменения

ЛИТЕРАТУРА

1. Г у с е в а, Е. В. Инфекционная анемия цыплят: обзор литературы / Е. В. Гусева, Т. А. Сатина, Т. А. Фомина // ВНИИЗЖ. — Владимир, 1997. — 72 с.

2. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / Б. У. Кэлнек [и др.] ; под ред. Б. У. Кэлнека, Х. Джона Барнса, Чарльза У. Биерда и др.; пер. с англ. И. Григорьева, С. Дорош, Н. Хрущева, И. Суровцев. — М.: АКВАРИУМ БУК, 2003. — С. 829-849.

3. Инфекционная анемия цыплят / А. С. Алиев [и др.] // Ветеринарная медицина. -2011. — № 1. — С. 49-53.

4. Серологический мониторинг инфекционной анемии цыплят и молекулярно-биологическая характеристика изолятов вируса / В. А. Лобанов [и др.] // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. — 2003. — N° 2. — С. 66-69.

Инфекционная анемия цыплят

[Infectious chicken anaemia]

Впервые это заболевание зарегистрировано и описано в Японии в 1979 г. Позднее оно также диагностировано в США, Швеции, Германии, Великобритании. От цыплят, вакцинированных ВГИ, выявлено заболевание, характеризующееся высокой смертностью, некротическими поражениями и сильно выраженной атрофией тимуса и бурсы, а также поражениями, сходными с таковыми при БМ. Из почек больных цыплят изолирован вирус анемии цыплят (АЦ), названный ЦАА82—2 и вирулентный ВБМ, названный ВБМ82—2. При заражении цыплят обоими агентами (двойная инфекция) отмечалась ранняя гибель цыплят, связанная с сильным некрозом и уменьшением количества лимфоцитов в лимфоидных органах и аплазией костного мозга.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. К заболеванию наиболее чувствительны к вирусу АЦ цыплята 1—8-дневного возраста. При возникновении заболевания вирусом может поражаться до 60 % птиц. Отход в среднем составляет 10%. При сочетании вируса анемии цыплят с реовирусами наблюдается более тяжелое течение болезни. Аналогичные явления наблюдаются при ассоциации инфекционной анемии цыплят с БМ и ИББ. В естественных условиях возбудитель передается вертикальным путем — через яйцо. Появление первых вспышек инфекционной анемии цыплят в Японии и Германии связывают с иммунизацией птицы против БМ вакциной, контаминированной вирусом анемии цыплят. Последний поражает цыплят и реже кур, заболевание сопровождается инфицированием гемопоэтических клеток {включая костный мозг), внутрикожными и внутримышечными геморрагиями, а также вовлечением в процесс лимфоидной ткани.

У заболевших цыплят отмечают сильную депрессию, отсутствие аппетита, замедление роста, истощение. Слизистые оболочки, кожа бледные, костный мозг развит недостаточно с изменением цвета до желтого и белого. Часто наблюдается гангренозный дерматит. Очаговые поражения кожи локализуются в области головы, крыльев, грудной клетки, брюшка, бедра и голени. Из трещин кожи вытекает кровянисто-серозный эксудат. По-видимому, причиной дерматитов является секундарная микрофлора. Болезнь может протекать со слабо выраженными признаками или бессимптомно, что зависит от состояния иммунитета. В естественных условиях заболевают обычно цыплята в возрасте 5 недель, если родители не имели соответствующих AT.

Патологоанатомические изменения проявляются септическим некротическим дерматитом, гепатитом, целлюлитом, миозитом, фибринозно-гнойным некротическим бурситом. У цыплят, которым в суточном возрасте инокулировали внутримышечно шт. BI-TK 5803 вируса анемии цыплят отмечали снижение гематокрита и подавление прироста массы тела особенно на 12—20 день. У большинства цыплят на пике инфекции макроскопически обнаруживают желтоватый костный мозг, атрофию тимуса и бурсы, увеличение и обесцвечивание печени. Гистологические поражения выявлялись у зараженных вирусом анемии цыплят, сначала в костном мозге и тимусе (на 6-й днень), затем в бурсе, селезенке и печени. На ранней стадии заболевания в гемопоэтических клетках наблюдали нарушение плазменных мембран, вакуолизацию, наличие внутриядерных включений, состоящих из тонких гранул гомогенного материала. В дегенеративных клетках обнаруживались конгломераты вирусподобных частиц. Незрелые клетки изредка находили на 12-й днень после заражения. Активный эритропоэз возобновлялся на 20-й день или позже. У выживших цыплят большинство тканей восстанавливались через 32 дня.

Характеристика возбудителя. Вирионы диаметром 18—25 нм. Геном вируса представлен циркулярной однонитчатой ДНК. Вирус состоит из 32 пустотелых морфологических единиц (капсомеров), представляющих правильный Т-3 икосаэдр. По данным венгерских исследователей, диаметр вирионов — менее 50 нм. Клонирован полный геном ВАЦ, который использован для гибридизации с ДНК полевых изолятов вируса. Разработан метод точечной гибридизации с использованием нерадиоактивно-меченных зондов. Все полевые изоляты обнаруживали высокую степень идентичности с клонированной прототипной ДНК.

Вирус устойчив к эфиру, хлороформу, рН 3, выдерживает прогревание при 56 °С в течение 60 мин. Вирус, выделенный в Венгрии Bia-штамм устойчив к хлороформу, проявил АГ родство с референс-штаммом CUX-1. Полевой изолят EF-88/78/276 оказался устойчив к воздействию хлороформа и нагреванию до 70 °С в течение 5 мин (16). Раствор йода и 1 %-ный гипохлорит натрия полностью инактивируют вирус в культуре клеток. Он устойчив к действию таких жирорастворителей как этиловый и метиловый спирты, ацетону, хлороформу.

Культивирование. Вирус репродуцируется в КЭ, но не вызывает у них патологических изменений и гибели. Вирус анемии цыплят (CAV-BIA) был выделен в культуре клеток MDC-MSB1 от однодневных цыплят-бройлеров различных птицеферм Венгрии.

Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится гомогенатом печени от погибших птиц. Она проявляется существенным отставанием птиц в росте, апластической анемией и общей атрофией лимфоидных органов. При экспериментальном заражении общие потери составляют 7—8 %, кроме того 25 % цыплят не набирают необходимой массы к 7 недельному возрасту. У СПФ-цыплят породы леггорн при внутримышечном заражении полевым материалом развивался анемический синдром и возбудитель выделялся в культуре клеток MDCC-MSB1 из костного мозга и лимфоидной ткани инфицированных цыплят. У цыплят, находившихся в контакте с зараженными суточного возраста, симптомов болезни не отмечали, однако у всех цыплят на 30-й день опыта в сыворотках крови обнаруживали AT к ВАЦ. Ни в одном случае смертельных случаев не отмечали, но на 14-й день опыта при вскрытии обнаруживали выраженную атрофию зобной железы и бурсы, желтизну костного мозга, а у некоторых птиц — подкожные и внутримышечные кровоизлияния. При введении ВАЦ однодневным цыплятам в течение 10 дней у них развивалась апластическая анемия, причем снижалось число как эритроцитов, так и лейкоциитов и тромбоцитов. В период с 12-го по 24-й день около 50 % цыплят погибало. С возрастом чувствительность их уменьшалась. Материнские AT защищают цыплят от инфекции.

По данным Otary et al., основные клинические признаки у 9 обследованных экспериментально зараженных изолятами ЦАА82—2 и БМ82—2 цыплят отмечалось угнетенное состояние и слабость или параличи ног. При вскрытии у всех птиц находили утолщение плечевого, сидалищного и блуждающего нервов, а также сильно выраженную атрофию тимуса и бурсы. Микроскопические исследования выявляли от незначительной до обширной лимфоидную инфильтрацию периферических нервов всех птиц.

Вирус удавалось выделить из разных органов инфицированных птиц. О наличии инфекции у зараженных суточных цыплят судят по пониженному числу эритроцитов, наличию апластического процесса клеток MDCC-MSB1 из индуцированной ВБМ лимфомы.

Эпизоотологические особенности. Заболевание чаше возникает у бройлеров в возрасте 14—21 дня. При ассоциации вируса АЦ и реовирусов наблюдают более тяжелое течение болезни. Аналогичное явление наблюдается при ассоциации ИАЦ с болезнями Гамборо и Марека. Заражение японскими и немецкими изолятами вируса суточных цыплят вызывало анемию, атрофию лимфоидных органов и костного мозга и в некоторых случаях гибель до 30 % Цыплят. В естественных условиях возбудитель передавался потомству вертикальным путем — через яйцо. Горизонтальное распространение вируса связано с субклинической инфекцией. Вертикальная передача встречалась в результате первичной инфекции несушек. Как клиническая, так и субклиническая формы инфекции наносят хозяйству большой экономический ущерб. Появление первых вспышек ИАЦ в Японии и Германии связывают с иммунизацией птицы против БМ вакциной, контаминированной вирусом АЦ. Японские исследователи отмечают, что проводить дезобработку среды в присутствии птицы крайне трудно.

Специфическая профилактика. Для профилактики инфекционной анемии цыплят некоторые исследователи рекомендуют создавать иммунитет у родительского поголовья с целью обеспечения передачи материнских AT потомству. Такая устойчивость цыплят может сохраняться до 3 недель. В Германии создана экспериментальная эмбриональная вакцина.

Инфекционная анемия цыплят (Реферат) — TopRef.ru

Министерство аграрной политики
Украины

Харьковская государственная
зооветеринарная академия

Кафедра эпизоотологии и
ветеринарного менеджмента

Реферат на тему:

Инфекционная анемия цыплят

Харьков 2007

План

  1. Определение болезни

  2. Историческая справка,
    распространение, степень опасности и
    ущерб

  3. Возбудитель болезни

  4. Эпизоотология

  5. Патогенез

  6. Течение и клиническое проявление

  7. Патологоанатомические признаки

  8. Диагностика и дифференциальная
    диагностика

  9. Иммунитет, специфическая
    профилактика

  10. Профилактика

  11. Лечение

  12. Меры борьбы

1. Определение болезни

Инфекционная анемия цыплят
(англ. — Infections chicken
anemia; вирусная анемия
цыплят, «синее крыло») — заболевание
молодняка раннего возраста, протекающее
с поражением костного мозга, иммунодефицитом
и заканчивающееся дерматитами,
гидроперикардитом и водянкой брюшной
полости.

2. Историческая справка,
распространение, степень опасности и
ущерб

Впервые возбудитель был выделен
в 1979 г. в Японии, а затем в 1983 г. в Европе
в птицеводческих хозяйствах при
выращивании бройлеров. Эпизоотологическая
и экономическая опасность болезни
заключается в том, что она регистрируется
во всех бройлерных птицехозяйствах,
сопровождается повышенной смертностью
(5…10 %, а в отдельных хозяйствах до 60 %).

3. Возбудитель болезни

Возбудитель инфекционной анемии
цыплят представляет собой мелкий
(23…25 нм) однонитчатый ДНК-содержащий
вирус. По последним данным, его относят
к семейству Circoviridae. Вирус
хорошо культивируется в развивающихся
куриных эмбрионах, СПФ-цыплятах и
культуре клеток.

Вирус устойчив к ацетону,
хлороформу, спирту и кислой среде (рН
3,0), погибает при 80 °С в течение 30 мин,
100 °С — за 10 мин. Дезинфицирующие препараты
в общепринятой концентрации быстро
инактивируют его.

4. Эпизоотология

К инфекции более всего чувствительна
птица мясного направления, особенно
бройлеры, что, вероятно, связано с
интенсивным ростом. Болезнь чаще
наблюдается у цыплят в возрасте 14…21
день, причем цыплята младшего возраста,
как правило, не болеют, так как у них
развитие инфекции предупреждают
материнские антитела.

Инфекция у бройлеров обычно
носит субклинический характер. Тем не
менее и клиническая, и субклиническая
формы оказывают иммуносупрессивное
влияние на организм (подавляют иммунитет),
что может стать причиной больших потерь.

При этом у цыплят в неблагополучных
хозяйствах четко выражена чувствительность
к заражению вирусом — после 3-недельного
возраста они уже устойчивы. Птица, не
имевшая контакта с вирусом, чувствительна
к нему в любом возрасте. Вертикальный
путь передачи отмечается, как правило,
в тех хозяйствах, в которые завозят
инкубационное яйцо из неблагополучных
пунктов.

В естественных условиях инфекция
распространяется контактным способом
у цыплят раннего возраста либо посредством
вакцинации их против болезни Марека в
суточном возрасте. При этом вирус может
быть как интегрирован в геном цыпленка,
так и находиться непосредственно в
вакцине. Последний путь распространения
инфекции представляет для промышленного
птицеводства наибольшую опасность,
если для производства вакцин используют
куриные эмбрионы, полученные из
коммерческих хозяйств.

5. Патогенез

Патогенез заболевания связан с
инфицированием интра- и экстрасинусоидальных
гемоцитобластов и ретикулярных клеток
в костном мозге и корковом слое тимуса.
После заражения быстро развивается
анемический синдром; цыплята отстают
в росте, возникают апластическая анемия
и атрофия лимфоидных органов. Красный
костный мозг замещается жировой тканью,
атрофируются зобная железа, фабрициева
сумка.

6. Течение и клиническое
проявление

Клинически заболевание проявляется
у цыплят 10-дневного возраста снижением
прироста живой массы и количества
съедаемого корма, вялостью, анемичностью
слизистых оболочек, взъерошенностью
пера, гангренозными дерматитами. Венозные
сосуды крыльев переполнены кровью,
вследствие чего заболевание еще называют
болезнью «синего крыла». Этот клинический
признак возникает в результате как
самостоятельного действия возбудителя,
так и развития бактериальной инфекции,
вызванной в первую очередь стафилококком,
колибактерией и клостридиями. Смерть
наступает в течение нескольких дней
после появления клинических признаков.
Отход цыплят составляет при стертой
клинической картине от 5 до 15 %, а в острых
случаях —до 50…60 %. Куры могут переболеть
в период начала яйцекладки в легкой
форме без снижения продуктивности.

7. Патологоанатомические
признаки

При патологоанатомическом
вскрытии павшей или больной птицы
макроскопически отмечают атрофию тимуса
и бурсы, увеличение и обесцвечивание
печени, застойные явления в сосудах
крыльев.

Кожа, особенно на крыльях,
вследствие геморрагии синеет (отсюда
одно из названий болезни), теряет
эластичность, через нее на поверхность
выделяется экссудат. Такая кожа легко
повреждается и становится своеобразными
воротами для вторичной микробной
инфекции, приводящей к гангренозному
дерматиту.

Иногда в особо тяжелых случаях
на вскрытии находят гидроперикардит,
асцит. Транссудат выходит в сердечную
сумку (до 5 мл), и это основной признак у
погибшего молодняка. В полости сердечной
сорочки можно обнаружить фибринозные
наложения. Наиболее тяжелая форма
сопровождается подкожной отечностью.
Сердце увеличено в объеме и расширено.

При гистологических исследованиях
в печени находят экстенсивные некрозы
с фибринозными наложениями, жировой
дегенерацией и отложением капелек жира
в клетках, лимфоидно-клеточную инфильтрацию
перипортального поля, гиперплазию
желчных ходов, пролиферацию и выраженный
цирроз. В сердечной мышце обнаруживают
кровоизлияния.

8. Диагностика и дифференциальная
диагностика

Диагностику заболевания проводят
по данным эпизоотологического анализа,
результатам определения антител к
вирусу анемии цыплят в основном в
непрямой РИФ, ИФА, а также путем выделения
вируса на чувствительных к нему
СПФ-эмбрионах и цыплятах.

Возможна диагностика болезни
на основании исследования крови больных
цыплят на 12… 16-й день после начала
заболевания — при этом гематокрит
снижен до 11…20 % при норме 30…40 %. Это
простой, но специфичный способ лабораторной
диагностики анемии цыплят, так как
другие вирусные агенты не вызывают
подобных изменений крови.

При дифференциальной диагностике
на инфекционную анемию цыплят в первую
очередь надо исключить инфекционную
бурсальную болезнь, стафилококк,
гиповитаминоз К, отравление микотоксинами.

9. Иммунитет, специфическая
профилактика

Для специфической профилактики
болезни за рубежом применяют вакцины
«Тимовак» (Германия), «Calnek»
(используют три метода аппликации
вакцины: перорально, выпаиванием с
питьевой водой, введением в подкрыльцовую
перепонку). Ведутся разработки
рекомбинантных вакцин на основе протеинов
вируса анемии цыплят.

10. Профилактика

Профилактика инфекционной анемии
цыплят основывается на строгом соблюдении
технологии по выращиванию бройлеров
изолированно от взрослого ПОГОЛОВЬЯ.

Бройлеров необходимо выращивать
с соблюдением плотности посадки (не
больше 14 голов на 1 м2 площади
пола), при выращивании в клетках плотность
посадки регулируется паспортными
данными на клеточное оборудование.
Необходимо обеспечить высокий уровень
неспецифических антител у цыплят в
первые недели выращивания; исключить
из рациона корма, пораженные микотоксинами.

При проектировании хозяйств
важно не допустить размещения на одной
территории инкубатория цыплят раннего
возраста и взрослой птицы, которая
инфицирована вирусом анемии. Особо
тщательно нужно дезинфицировать
инкубационные яйца, на поверхности
которых может находиться вирус. Применяют
общепринятые меры по подготовке, очистке
и дезинфекции помещений, в которых
содержится птица.

11. Меры борьбы

Меры борьбы с заболеванием
состоят из организационно-хозяйственных,
ветеринарно-санитарных мероприятий и
специфической профилактики болезни.

Список использованной литературы

1. Бакулов И.А. Эпизоотология с
микробиологией Москва: «Агропромиздат»,
1987. — 415с.

2. Инфекционные болезни животных
/ Б.Ф. Бессарабов, Е. С. Воронин и др.; Под
ред. А.А. Сидорчука. — М.: КолосС, 2007. —
671 с

3. Алтухов Н.Н. Краткий справочник
ветеринарного врача Москва:
«Агропромиздат», 1990. — 574с

4. Довідник лікаря ветеринарної
медицини/ П.І. Вербицький,П.П. Достоєвський.
– К.: «Урожай», 2004. – 1280с.

5. Справочник ветеринарного
врача/ А.Ф Кузнецов. – Москва: «Лань»,
2002. – 896с.

6. Справочник ветеринарного
врача/ П.П. Достоевский, Н.А. Судаков,
В.А. Атамась и др. – К.: Урожай, 1990. – 784с.

7. Гавриш В.Г.
Справочник ветеринарного врача, 4
изд. Ростов-на-Дону:
«Феникс», 2003. — 576с.

Вирусная анемия цыплят (CAV) — признаки и пути распространения

Инфекция молодых цыплят вызывает анемию, снижение прибавки в весе, временную иммуносупрессию и повышение смертности. Заражение цыплят старше 3–4 недель обычно не вызывает клинических признаков, но может вызвать иммуносупрессию, приводящую к вторичным инфекциям, или может привести к экономическим потерям даже при отсутствии признаков какого-либо заболевания.

Специфического лечения не существует, а борьба с заболеванием осуществляется путем вакцинации. Инфекцию можно диагностировать по снижению гематокрита и обнаружению нуклеиновых кислот CAV в лимфоцитах крови с помощью ПЦР или посмертно по атрофии тимуса, истощению лимфобластов коры тимуса, бледному костному мозгу и обнаружению ДНК или антигенов CAV в тканях.

Распространение болезни у курей

Горизонтальная передача инфекции вируса анемии кур происходит:

— фекально-оральным путем,

— респираторным путем,

— через инфицированный эпителий перьевых фолликулов. Загрязненная подстилка — частый источник заражения.

Вертикальная передача происходит:

— когда вылупляются цыплята из яиц зараженных курей.

— петухи, выделяющие CAV в сперму, являются еще одним источником. Для предотвращения вертикальной передачи рекомендуется вакцинация стад до начала яйценоскости.

Заболеваемость наиболее популярна среди цыплят в возрасте 8-21 суток и может составить 60%, а летальность 10%.

Цыплята с отрицательными материнскими антителами восприимчивы к инфекциям и болезням до 1–2-недельного возраста. Напротив, цыплята с положительными материнскими антителами защищены от болезней и, возможно, от инфекции. Возрастная устойчивость к клиническим заболеваниям, но не к инфекции, начинается в возрасте около 1 недели и тесно связана со способностью цыплят вырабатывать антитела к вирусу после заражения.

Клинические признаки болезни цыплят

Признаков болезни или неблагоприятного воздействия на яйценоскость в результате инфицирования вирусом куриной анемии не возникает, когда заражаются взрослые цыплята. Однако вертикальная передача или инфицирование цыплят с отрицательными материнскими антителами в возрасте до 1 недели может вызвать клиническое заболевание через 12–17 дней после вылупления или инфицирования.

Клинические признаки включают:

— анемия

— бледность

— анорексия

— вялость

— депрессия

— водянистая и медленно свертывающаяся кровь

— снижение прибавки в весе

— высокий уровень смертности от вторичных осложняющих инфекций.

Грубые поражения

— Органы бледные.

— Вилочковая железа обычно атрофирована, а сумка Фабрициуса может быть маленькой.

— Костный мозг бледный или желтый.

— Кровоизлияния могут присутствовать внутри или под кожей, а также в мышцах и других органах.

— Также могут присутствовать поражения, связанные с вторичными инфекциями.

Самый эффективный способ контроля инфекции у курей — ликвидация вируса в первичных родительских стадах путем вакцинации. Вторичные бактериальные инфекции можно лечить, используя ветеринарные антибиотики.

Инфекционная анемия цыплят-бройлеров или болезнь «синее крыло»

Добрый день, опытные и начинающие птицеводы! Сегодня на разборе полетов инфекционная анемия цыплят-бройлеров: от характеристики возбудителя до профилактических мероприятий. Расскажем об анемии цыплят инфекционной природы. В народе этот недуг называют «синим крылом».

Инфекционной анемией обычно страдает молодняк младших возрастных групп. При такой патологии у цыплят поражается костный мозг, развивается иммунодефицит, дерматит, водянка брюшной полости и другие др. нарушения.

Содержание статьи:

Инфекционная анемия цыплят-бройлеров

Краткий исторический экскурс. Патоген, провоцирующий патологию, впервые выделили японские ученые. Произошло это в 79 г. прошлого века. Европейские заводчики птицы столкнулись с инфекционной анемией цыплят через четыре года – в 83 г. 20 ст. Инфекция диагностировалась у цыплят-бройлеров.

Львиная часть экономических потерь от болезни связана с большим отходом пернатых. Нередко в научной печатной периодике говорится о 50-60-процентном отходе бройлеров.

Характеристика провокатора проблемы. Размер однонитчатого ДНК-содержащего вируса, провоцирующего инфекцию, колеблется в пределах 23-25 нм. Ученые нынешнего поколения считают, что вирус является представителем семейства Circoviridae.

Для культивирования патогена, как правило, используются куриные эмбрионы, цыплята и клетки.

Вирусу нестрашно действие ацетона, хлороформа, спирта. Его инактивирует нагревание. Так, при 80-градусной температуре вирусные частицы становятся неопасными через полчаса. При 100-градусной температуре они утрачивают вирулентность через 10 минут.
Возбудитель очень чувствителен к дезинфицирующим средствам.

Эпизоотологические данные. Основная группа риска – интенсивно растущая мясная птица, в том числе 2-3-недельные цыплята-бройлеры. Ученые говорят, что чем выше среднесуточные приросты, тем вероятнее патология.
Недавно было установлено, что цыплята в течение первых двух недель постэмбрионального периода болеют редко, что, вероятно, связано с материнскими антителами.

Как протекает инфекционная анемия цыплят-бройлеров

Формы течения инфекции:

  • Субклиническая;
  • клиническая.

При любой форме недуга у птицы ухудшается иммунный статус. Отсюда большой отход пернатых.

В неблагополучных районах молодняк, контактирующий с больной птицей, приобретает устойчивость к патогену в возрасте от трех недель. В благополучных хозяйствах цыплята заболевают независимо от принадлежности к той или иной возрастной группе.

Когда источником заразы служат приобретенные инкубационные яйца, говорят о вертикальной передаче инфекции.

Находясь в естественной среде, птица на ранних стадиях развития заражается при контакте с больными цыплятами. Также вирус передается суточным цыплятам, вакцинируемым против болезни Марека. В этом случае ДНК вирусных частиц или встраивается в генетический аппарат птицы, или входит в состав вакцины.

Промышленные птицеводческие предприятия чаще несут потери от инфекции, передающейся по последнему пути. Почему? Дело в том, что импортные вакцины создаются при использовании куриных эмбрионов.

Несколько слов о патогенезе. У цыплят после заражения вирусом поражаются гемоцитобласты и ретикулярные клетки костного мозга и коркового слоя тимуса. Далее идет быстрое развитие анемического синдрома. Такая картина дополняется резким снижением среднесуточных привесов, атрофией лимфоидных органов, замещением красного костного мозга жировой тканью, атрофией железы, относящейся к зобу. И это далеко не все изменения, провоцируемые вирусом.

Симптомы анемии у бройлерных цыплят

Внешнее проявление патологии. Клинические признаки инфекции у молодняка мясных кур можно наблюдать, начиная с 10-14-дневного возраста. Пернатые начинают отставать в росте, неохотно поедать корма (нередко вовсе отказываются от пищи), становятся вялыми. Другие спутники инфекции:

  • Анемичные слизистые;
  • взъерошенное оперение;
  • гангренозные дерматиты;
  • вены крыльев увеличенного диаметра – результат переполнения сосудов кровью. Отсюда, кстати, и второе название болезни – «синее крыло».

Когда клинические признаки размыты, гибнет около 10% проблемных цыплят. Инфекция, протекающая в острой форме, ведет к 60-процентному отходу бройлеров.

Внутренние патологические изменения. Если причиной смерти цыплят является инфекционная анемия после вскрытия можно наблюдать:

  • Атрофированный тимус;
  • увеличенную и обесцвеченную печень;
  • сосуды крыльев с застоявшейся кровью;
  • сердечная сумка с 5 мл транссудата и часто с фибринозными наложениями;
  • отеки под кожей;
  • увеличенное в объеме и расширенное сердце.

К изменениям гистологии печени относится экстенсивный некроз, фибринозные наложения, жировая дегенерация. Все это дополняется гиперплазией желчных ходов, пролиферацией и выраженным циррозом.

Выше приведены далеко не все внутренние патологические процессы, регистрируемые при рассматриваемом недуге.

Диагностические мероприятия

Для подтверждения или исключения инфекционной анемии цыплят-бройлеров проводится эпизоотологический анализ, РИФ и ИФА.

Также проводятся гематологические исследования. О патологии говорят при 11-20-процентном снижении концентрации гематокрита у 12-16-дневного молодняка. Такой подход к диагностике инфекционной анемии является самым простым и точным, так как лишь вирус, вызывающий рассматриваемый недуг, ведет к подобному нарушению.

Обязательное условие – исключение инфекции, вызванной стафилококком, гиповитаминоза К, микотоксикоза.

Особенности профилактики

Специфический иммунитет у птицы формируется после вакцинации следующими препаратами:

  • Тимовак – эффективная немецкая вакцина;
  • Calnek – вакцина, к достоинствам которой относится возможность ее включения в питьевую воду или введения в складку под крылом.

Сегодня ученые многих стран с развитым птицеводством озадачены созданием рекомбинантных вакцин. В качестве основы для них используются протеины патогена.

К основным профилактическим мероприятиям, направленным на недопущение инфекционной анемии бройлеров, относится:

  • Строгое соблюдение всех норм, разработанных для промышленного выращивания мясной птицы;
  • отведение птице разных возрастов отдельных помещений или как минимум секций;
  • обеспечение высокой концентрации неспецифических антител у молодняка в течение первых недель постэмбрионального периода;
  • исключение из кормовой базы кормом с микотоксинами;
  • соблюдение графика дезинфекции птичника. В любительском птицеводстве раз в полгода курятник освобождается от бройлеров, ремонтируется (при необходимости), чистится, обеззараживается и белится.

Также важно соблюдать нормативную плотность посадки. На каждый квадрат пола должно приходиться 14 птиц. Если принята клеточная система содержания бройлеров, нормативное значение показателя берется из паспорта клеточного оборудования.

Слава Богу, что инфекционная анемия цыплят-бройлеров встречается у нас не часто. Но полезно знать симптомы болезни «синее крыло».

Удачи!

Подписывайтесь на обновления сайта и наш канал «Курочка» в Яндексе.

До встречи, коллеги! А мы пока подготовим для вас новую и интересную информацию!

Вам понравились наши советы? Делитесь с друзьями в соц. сетях! Смотрите современные товары для птицеводов и животноводов, которые укрепляют здоровье питомцев и облегчают наш труд. 

Вирус куриной анемии — обзор

Вирус инфекционной анемии цыплят

CIAV — это небольшой ДНК-вирус размером примерно 25 нм, который в настоящее время принадлежит к Circoviridae , род Gyrovirus, но, скорее всего, будет классифицирован как единственный род в Gyrovirinae irinae. предлагаемого нового семейства Anelloviridae [72]. Он имеет одноцепочечный ковалентно замкнутый геном ДНК размером 2,3 т.п.н., который дает один полицистронный транскрипт, кодирующий три белка.Вирус чрезвычайно устойчив к дезинфицирующим средствам и может выдерживать тепловую обработку при 80 ° C в течение 15 минут. Из-за его повсеместного присутствия в куриных стадах, небольшого размера и устойчивости к физическим и химическим воздействиям он может присутствовать в качестве контаминанта в других вирусах, особенно если эти агенты размножаются в куриных яйцах с зародышем. Таким образом, он может стать мешающим фактором в исследованиях иммуносупрессивных свойств других патогенов.

Были рассмотрены патогенез и иммуносупрессия, вызываемые CIAV [5,73,74].Заражение цыплят может привести к клиническому заболеванию путем вертикальной передачи, которая происходит, когда куры впервые заражаются во время яйценоскости, или путем горизонтальной передачи в течение первых нескольких недель возраста. Однако большинство цыплят защищены от раннего заражения материнскими антителами, и клиническое заболевание проявляется нечасто. Инфекция после 3-недельного возраста в основном носит субклинический характер, но может привести к значительной иммуносупрессии. Развитие вирус-нейтрализующих (VN) антител имеет важное значение для ограничения репликации вируса, а иммуносупрессия, вызванная, например, IBDV, вовлечена в длительную репликацию CIAV.

Небольшой геном, кодирующий только три белка, VP1, VP2 и VP3 или апоптин, требует инфицирования делящихся клеток, чтобы использовать клеточный аппарат для репликации вирусной ДНК. VP1 представляет собой капсид и единственный белок, присутствующий в вирионах, тогда как VP2 играет несколько ролей в репликации вируса. Апоптин вызывает апоптоз инфицированных клеток, и механизмы индукции апоптоза были подробно изучены, отчасти потому, что апоптин может использоваться в качестве потенциального противоракового лечения у людей [75,76].Делящиеся клетки, чувствительные к инфекции, представляют собой гемоцитобласты в костном мозге, предшественники Т-клеток в тимусе или делящиеся Т-клетки в ответ на антигенную стимуляцию. Заражение гемоцитобластов приводит к уменьшению количества эритроцитов, тромбоцитов и гранулоцитов. Потеря последних двух типов клеток важна, потому что тромбоциты и гранулоциты являются важными эффекторными клетками во время бактериальных инфекций, и, как следствие, вторичные бактериальные инфекции (например, «болезнь синего крыла») часто связаны с иммуносупрессией, индуцированной CIAV.

Adair et al. [77] сообщили, что CD3 + CD8 + TCRαβ клетки селезенки составляют основную CIAV-инфицированную популяцию в селезенке. Недавно Haridy et al. [78] сообщили, что инфекция у 4-недельных цыплят приводила к умеренной потере клеток CD4 + и CD8 + в селезенке и тимусе. Инфекция у однодневных цыплят вызывает более серьезное истощение клеток CD4 + и CD8 + (например, [79]). Эффект репликации вируса в этих клетках особенно важен, когда репликация CIAV происходит одновременно с образованием цитотоксических Т-клеток (CTL) в ответ на вакцинацию или заражение вторым патогеном.Markowksi-Grimsrud и Schat [80] сообщили об отсутствии REV-специфических CTL через 7 дней после коинфекции птиц REV и CIAV, когда CIAV активно реплицировался, на основании количественного анализа RT-PCR в реальном времени. Поскольку не было никакого влияния инфекции CIAV на транскрипцию IL-2 или IFN-γ через 7 дней PI, было высказано предположение, что отсутствие патоген-специфичных CTL было вызвано CIAV-индуцированным апоптозом клеток CD8 + во время генерации. CTL. В отличие от воздействия на CTL, естественные клетки-киллеры (NK) не были затронуты инфекцией CIAV [81].Основываясь на своих исследованиях инфекции CIAV в клетках MSB-1, Peters et al. [82] предположили, что VP2 может также играть роль в иммуносупрессии посредством подавления антигенов класса I главного комплекса гистосовместимости (MHC). Важность этого наблюдения для иммуносупрессии трудно оценить, поскольку предполагается, что клетки, инфицированные CIAV, станут апоптозными.

Иммуносупрессия, вызванная CIAV, была причинно связана с увеличением частоты других заболеваний [5]. Например, инфекция CIAV может усугубить заболевание, вызванное вирусом инфекционного бронхита (IBV) [83], вероятно, влияя как на CMI, так и на ответы антител.Ван Гинкель и др. [84] продемонстрировали снижение местных антител к IBV в железе Хардера и слезной жидкости у цыплят, инфицированных CIAV. Этот эффект, скорее всего, был вызван уменьшением количества CD4 + Th-клеток в результате инфекции CIAV.

Влияние инфекции CIAV на цитокины не было хорошо изучено, и ранние исследования основывались на биологических анализах, представляющих современное состояние в то время (обзор [85]). Совсем недавно количественные (q) ОТ-ПЦР-анализы были использованы для исследования влияния инфекции CIAV на цитокины в отношении репликации вируса.К сожалению, немногочисленные опубликованные результаты не включали эффект репликации вируса до 7 дней ИП, когда наблюдается высокий уровень репликации вируса [80,86]. В то время иммуносупрессивные эффекты уже проявляются при повреждении макрофагов [87] и CTL [80], но на уровни мРНК IFN-γ, IL-2 и IL-1β это не влияет [80].

Очевидно, необходимы дополнительные исследования с использованием количественных ОТ-ПЦР или иммуноферментных анализов (ИФА) для определения воздействия инфекции CIAV на цитокины, начиная с 2–3 дней ИП, поскольку вирусные антигены могут быть обнаружены в лимфоидных тканях и костях. костный мозг уже через 3–4 дня ИП [88].Интересно, что повреждение вилочковой железы и костного мозга было довольно обширным в течение 3–12 дней ИП, хотя относительно небольшое количество клеток в этих органах было положительным по вирусным антигенам. Коллапс тимуса, вероятно, является результатом повреждения сети цитокинов, необходимых для созревания Т-клеток. Подробные исследования ранних изменений цитокинов во время инфекции CIAV необходимы для понимания последующей иммуносупрессии.

Филогенетическая и молекулярная характеристика вируса куриной анемии на юге Китая с 2011 по 2012 год

Обнаружение и выделение вируса

Тринадцать вирусов были идентифицированы как CAV из пятнадцати образцов тимуса и восьми образцов селезенки с помощью ПЦР-анализов.13 CAV подвергали вирусной изоляции in vitro в клетках MDCC-MSB1. Через 3 дня культивирования клеток мы собрали вирусы, и их присутствие было подтверждено анализом ПЦР с праймерами NC1 и NC2. Соответственно, было подтверждено присутствие всех тринадцати вирусов. Среди 13 КАВ девять штаммов (GD-C-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-H-12, GD-J-12, GD-L-12 , GD-M-12, GD-N-12) были выделены в провинции Гуандун, Китай, 2012 г. Штаммы GD-B-12 и GD-I-12 были выделены в провинции Гуанси, Китай, 2011 г.Штамм GD-G-12 был выделен в провинции Хайнань, Китай, 2011 г., а штамм GD-K-12 был выделен в провинции Хайнань, Китай, 2012 г.

ПЦР-амплификация полного генома КАВ

ПЦР-амплификация Полный геном 13 положительных изолятов CAV с использованием праймеров CQ1F и CQ1R давал специфический продукт 1778 п.н., а праймеры CQ2F и CQ2R давали специфический продукт 831 п.н., как и ожидалось.

Порядковые номера доступа

Последовательности генома CAV, охарактеризованные в этом исследовании, были представлены в GenBank со следующими номерами доступа: KF224926, KF224927, KF224928, KF224929, KF224930, KF224931, KF224932, KF224224934, KF224934, KF224934 .

Полное выравнивание последовательностей и филогенетический анализ

Идентичность нуклеотидных последовательностей между геномами 13 изолятов CAV и геномами 37 изолятов CAV, о которых сообщалось из GenBank, варьировалась от 95,7% до 99,7%. Минимальное разнообразие составляло 0,3% между изолятами GD-1-12 и GD-G-12, а максимальное разнообразие составляло 4,4% между изолятами GD-K-12 и тремя изолятами (GD-L-12, GD-M-12 и GD -Н-12). Мы идентифицировали 92 нуклеотидные мутации по сравнению с 37 другими полными последовательностями CAV; эти мутации ранее не наблюдались: положения nt 14, 80, 105, 106, 116, 119, 122, 123, 124, 164, 169, 181, 182, 187, 195, 251, 267, 287, 308, 318, 361, 367, 400, 416, 417, 500, 504, 513, 518, 531, 535, 536, 537, 538, 542, 544, 563, 644, 659, 696, 747, 863, 864, 941, 969, 994, 1012, 1053, 1056, 1059, 1066, 1137, 1245, 1257, 1269, 1270, 1298, 1323, 1330, 1393, 1395, 1396, 1434, 1452, 1457, 1485, 1493, 1610, 1740, 1774, 1797, 1810, 1839, 1840, 1847, 1905, 1923, 1951, 2013, 2016, 2085, 2173, 2185, 2191, 2194, 2201, 2202, 2204, 2214, 2259, 2275, 2278.Общие полиморфизмы, которые мы наблюдали, включали следующее: T14C в изолятах GD-D-12 и GD-F-12; девять изолятов (GD-B-12, GD-C-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-H-12, GD-I-12, GD-K-12 , GD-L-12) содержал полиморфизм C122G; C123G был подтвержден в изолятах GD-D-12, GD-E-12 и GD-I-12. T181C был подтвержден в изолятах GD-H-12 и GD-M-12; A187G в изолятах GD-C-12 и GD-E-12; G251A в изолятах GD-H-12 и GD-I-12; T308A в изолятах GD-H-12 и GD-I-12; G941A в изолятах GD-L-12 и GD-N-12; C1137A в изолятах GD-H-12 и GD-I-12; и C1270T в изолятах GD-D-12 и GD-I-12; C1434T в изолятах GD-H-12 и GD-I-12; T1740C в изолятах GD-H-12 и изолятах GD-I-12.Три изолята (GD-E-12, GD-G-12 и GD-H-12) содержали полиморфизм C2204A.

Среди 13 изолятов КАВ мы идентифицировали 187 нуклеотидных мутаций. Мы также обнаружили, что было 83 общих нуклеотидных мутации между 187 мутациями среди 13 последовательностей CAV и 92 мутациями по сравнению с 37 другими последовательностями полного генома CAV. Это были T14C, T80C, C105T, G106C, C116A / G, T119G / A, G122C, C123G, C124G, C164T, C169T, T181C, C182A, A187G, T195C, G251A, A267G, T3036736, G251A, A267G, T30367A, G418G, G128A, G218G A417G, A500G, A504G, A513T, A518C, C531G, C535A, G536C, A537T, T538G, A542T, C544T, A644G, A659C, A696G, G941A, G969A, G994C, C101210T, A1059A / A1053A C1257T / A, G1269T, C1270T, A1298G, A1323G, A1330G, A1393C, G1395A, A1396G, C1434T, A1452G, A1457G, G1485A, T1493C, G1610A, T1740C, A1774G, A1797G, C18539G, C18539G, C18539G, C18539G T1951G, G2013A, C2016T, C2173A, G2185A, G2191T, G2194T, C2201G / A, C2202G, A2204C, A2214C, A2259T, A2275T и A2278G.Было обнаружено девять различных нуклеотидных мутаций между 92 положениями по сравнению с 37 последовательностями CAV и 83 общими мутациями. Это были C287G, A400G, C563T, T747C, G863A, A864T, A1066G, C1810G и C2085G. Однако среди 13 изолятов CAV в положении 566 было идентифицировано 187 нуклеотидных мутаций; изолирует GD-C-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-G-12, GD-H-12, GD-I-12, GD-J-12, GD -K-12, GD-L-12, GD-M-12 и GD-N-12 все показали C566G.

Полное филогенетическое дерево было получено путем сопоставления 37 последовательностей, в результате чего были выделены две основные группы (рис.1a): один с одиннадцатью штаммами (группа II; AY839944, DQ141670, JQ6

, DQ124935, AF395114, AF311900, DQ124936, DQ217400, AF285882, CAU65414, AB02740) и другой с оставшимися 25 последовательностями (группа I). Интересно, что за исключением GD-K-12, все 12 изолятов южного Китая были сгруппированы в большой кластер, который показал внутригрупповую рекомбинацию.

Рисунок 1

(а) Филогенетический анализ полных последовательностей 37 изолятов КАВ из разных частей мира, перечисленных в GenBank.Десять южнокитайских изолятов (GD-B-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-G-12, GD-H-12, GD-I-12, GD- К-12, ГД-Л-12, ГД-Н-12) отмечены красными треугольниками. Изолят GD-J-12 отмечен красным кружком. Два изолята (GD-C-12 и GD-M-12) представлены красными квадратами. (b) Филогенетический анализ генов VP2, VP3 и частичного VP1 54 штаммов CAV из разных частей мира, перечисленных в GenBank. Десять южнокитайских изолятов (GD-B-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-G-12, GD-H-12, GD-I-12, GD- К-12, ГД-Л-12 и ГД-Н-12) отмечены красными треугольниками.Изолят GD-J-12 отмечен красным кружком. Два изолята (GD-C-12 и GD-M-12) представлены красными квадратами; (c и d) представляют рекомбинантную область (2108–44) и нерекомбинантную область (45–2107) соответственно. Предполагаемый рекомбинант показан кружками, а предполагаемые родительские линии показаны квадратами. Штамм Cux-1 использовался как внешняя группа. Всю последовательность анализировали с использованием программного обеспечения MEGA 5.1 с методами филогенетического дерева с соединением соседей (NJ) вместе с последовательностями, охарактеризованными в этом исследовании.Каждое дерево было создано с использованием консенсуса из 1000 повторений начальной загрузки.

Нуклеотидное выравнивание различных кодирующих областей генома CAV

Полные нуклеотидные последовательности VP1, VP2 и VP3 были получены из полноразмерных генов на основе информации о последовательностях в GenBank. Полные последовательности генов VP1, VP2 и VP3 имели длину 1350, 651 и 366 нуклеотидов соответственно и не содержали вставок или делеций.

Последовательности VP1 изолятов CAV южного Китая содержали 40 нуклеотидных мутаций, которые ранее не наблюдались; они были расположены в остатках 32, 33, 110, 138, 163, 181, 222, 225, 228, 235, 306, 414, 426, 438, 439, 467, 492, 562, 564, 565, 621, 626, 654 , 662, 779, 909, 943, 966, 979, 1008, 1009, 1016, 1071, 1074, 1092, 1167, 1182, 1185, 1254 и 1342.C228 / 306A был обнаружен в двух изолятах CAV из южного Китая (GD-I-12 и GD-H-12), тогда как GD-J-12 и GD-K-12 имели разные мутации в положении 426. GD-H-12. и GD-I-12 оба имели мутацию T909C. Область VP2 содержала 25 вариабельных положений, которые были обнаружены в 13 изолятах из южного Китая, в положениях 3, 42, 58, 136, 142, 146, 155, 160, 173, 177, 178, 179, 180, 184, 186, 205, 208, 286, 301, 338, 389, 506, 583, 611 и 636. Анализ 366 нуклеотидов VP3 выявил 18 вариабельных положений, которые были специфичны для последовательностей CAV южного Китая (нуклеотиды 30, 36, 40, 49 , 54, 67, 71, 72, 73, 74, 78, 80, 99, 102, 180, 195, 232 и 283).

Аминокислотное выравнивание различных кодирующих областей генома CAV

Когда аминокислотные последовательности 13 генов CAV сравнивали с таковыми репрезентативных штаммов CAV, стало ясно, что все 13 штаммов изолята имеют 52 варианта аминокислот (в положениях 5, 27, 36, 39, 40, 41, 42, 55, 61, 63,84, 88, 96, 103, 134, 139, 165, 167, 177, 179, 180, 181, 182, 188, 189, 215, 220, 290, 314, 332, 356, 423, 424, 433, 444, 465, 466, 486, 498, 537, 592, 604, 616, 651, 724, 728, 730, 731, 733, 734, 747 и 760).В положении 40 штаммы GD-F-12 и GD-M-12 содержали аминокислоты G и E соответственно. Вариация аминокислот на основе последовательности VP1 (450 AA) показала общую вариацию 0,7–4,0% среди всех изолятов по сравнению с 37 последовательностями CAV. В гипервариабельной области VP1 от положения 139 до 151 изолят GD-D-12 показал две мутации, W146C и P147S, тогда как изолят GD-I-12 содержал только одну мутацию в гипервариабельной области (P147S). Остаток 394 в VP1 был главной генетической детерминантой вирулентности, при этом глутамин (Q) и гистидин (H) представляли высокопатогенные и менее патогенные вирусы, соответственно 25,26 .Все изоляты CAV из южного Китая содержали глутамин в положении 394, что позволяет предположить, что все они представляют собой высокопатогенные вирусы. Аминокислоты в положениях 139 и 144 играют жизненно важную роль в росте и распространении вируса, учитывая, что VP1 Q139 и / или Q144 связаны с уменьшенным распространением 20 . Только изолят GD-K-12 имел как Q139, так и Q144, что указывало на то, что изолят GD-K-12 имел низкие скорости роста и распространения. Однако остальные 12 CAV (GD-B-12, GD-C-12, GD-D-12, GD-E-12, GD-F-12, GD-G-12, GD-H-12, GD -I-12, GD-J-12, GD-L-12, GD-N-12 и GD-M-12) все содержали остатки K139 и E144.По сравнению с последовательностями VP1, VP2 и VP3 были относительно консервативными. Последовательности VP2 и VP3 штамма GD-G-12 имели 99,5% и 99,2% максимальной аминокислотной идентификации для GD-H-12, соответственно.

Выравнивание нуклеотидных последовательностей и филогенетический анализ генов VP2, VP3 и частичного VP1

В дополнение к полному выравниванию последовательностей и филогенетическому анализу 13 изолятов CAV мы также выполнили выравнивание последовательностей и филогенетический анализ VP2, VP3 и частичный Гены VP1 по сравнению с 54 другими полными последовательностями CAV, перечисленными в GenBank.Нуклеотиды 54 других полных геномов КАВ включали 1766 п.н., которые содержали почти всю кодирующую область КАВ, за исключением нескольких аминокислот на С-конце VP1. Было 54 нуклеотидных мутации по сравнению с 54 другими полными последовательностями CAV; эти мутации ранее не наблюдались: положения nt 3, 42, 58, 59, 142, 146, 155, 160, 173, 177, 178, 179, 180, 184, 186, 205, 208, 286, 301, 338, 389, 506, 583, 611, 636, 654, 698, 708, 779, 887, 899, 911, 912, 940, 965, 972, 1035, 1037, 1038, 1099, 1127, 1135, 1252, 1382, 1400, 1416, 1439, 1452, 1482, 1489, 1495, 1514, 1543 и 1544.Мы также идентифицировали 136 нуклеотидных мутаций в 13 изолятах КАВ. В 13 изолятах КАВ обнаружена 51 общая нуклеотидная мутация по сравнению с ранее идентифицированными 54 нуклеотидными мутациями в 54 других полных последовательностях КАВ. Это были G3A, A42G, G58A, A59G, A142G, A146G, A155T, A160C, C173G, C177A, G178C, A179T, T180G, A184T, C186T, C205T, A286G, A301C, A338G3, G611T, G6389C, G6389C, G6389C C654T, C698A, A708G, C779A, T887C, C899T, G911T, C912T, A940G, A965G, A972G, A1035C, G1037A, A1038G, G1099A, G1127A, T1135C, G1252A14, A14GT, T139514, T1135C, G1252A14, A1452G, T139514G, T1135C, G1252A14, T139514, T139514, T1543C и G / T1544A.

Филогенетический анализ 13 геномов CAV, охарактеризованных в этом исследовании, вместе с 54 штаммами CAV из разных стран, привел к созданию пяти отдельных групп последовательностей (A, B, C, D и E) со значениями начальной загрузки 37, 93 и 75. Группа A могла быть далее разделена на подгруппы A1, A2 и A3, группа D была разделена на подгруппы D1, D2, D3 и D4, а группа E была разделена на подгруппы E1, E2 и E3. 13 последовательностей CAV были расположены в виде двух разных кластеров в группах A1 и E3.За исключением GD-K-12, все 12 изолятов южного Китая были сгруппированы в группу A1, что означало, что группа A1 была основной южной китайской ветвью (рис. 1b).

Группа A представляет собой основную группу из 42 изолятов, происходящих из Китая, Японии, Малайзии, США, Австралии, Индии, Германии и Нидерландов. Группа B представляла собой два изолята, происходящих из Китая. Группа C представляла собой единственный изолят, происходящий из Китая. Группа D представляла девять изолятов, происходящих из Китая, США, Бангладеш и Индии.Группа E представляла 13 изолятов, происходящих из Китая, Японии, Индии, Малайзии и США.

Обнаружение предполагаемой точки останова рекомбинации внутри группы

Для того, чтобы идентифицировать рекомбинацию в геномах, было построено начальное филогенетическое дерево на основе 50 последовательностей CAV со всего мира. Филогенетический анализ показал, что GD-C-12, GD-J-12 и GD-M-12 сгруппированы в группу I (рис. 1a). Рекомбинация могла произойти в области частичного кодирования и области частичного некодирования (рис.2а и 2б). Как показано на фиг. 2, рекомбинация между линиями, представленными изолятом GD-C-12 группы I в качестве основного родителя и GD-M-12 группы I в качестве второстепенного родителя, привела к рекомбинантному изоляту GD-J- 12 с отображением точек останова рекомбинации на позиции 2,108 (начальная точка останова) и 44 (конечная точка останова). Чтобы получить представление о возможных событиях рекомбинации, был проведен филогенетический анализ профиля рекомбинантных вирусов с помощью программы Simplot (рис. 2c). Чтобы подтвердить результаты анализа Simplot, мы извлекли положения на противоположных сторонах точки останова из выравнивания, то есть положения 2108–44 и 45–2107, соответственно, чтобы определить статистическую вероятность рекомбинации.Штамм AJ297684 использовался как внешняя группа. GD-J-12 кластеризуется вместе с GD-M-12 только тогда, когда рекомбинантная область рассматривается для построения дерева, тогда как в дереве, представляющем только нерекомбинантную область, GD-C-12 кластеризуется с GD-M-12 (рис. . 1c и 1d). Различия в филогенетических отношениях указывают на возможное событие рекомбинации в GD-J-12. Согласно структуре гена CAV (фиг. 3) рекомбинантная область охватывает частичную область VP1 и частично некодирующую область.Исследования подтвердили, что CAV-рекомбинация обнаруживается только внутри группы 23,24 , но наше исследование выявило событие внутригрупповой рекомбинации среди CAV, которое ранее не описывалось.

Рисунок 2

(a и b) Анализ загрузочного сканирования рекомбинантных, а также основной и второстепенной родительских последовательностей. Bootscan был основан на модели попарного расстояния с размером окна 200, размером шага 50 и 1000 копий начальной загрузки, созданных RDP4. программа. (c) Сравнение трех изолятов CAV: GD-J-12, GD-C-12, GD-M-12.В качестве запроса использовался изолят GD-J-12. Последовательность AJ297684 была включена как внешняя группа. Ось Y показывает процент идентичности в скользящем окне шириной 80 п.н., центрированном на нанесенной позиции, с шагом между графиками 50 п.о.

Рис. 3

Карта изолята GD-J-12 и точки останова рекомбинации (начальная точка останова на 2108 и конечная точка останова на 44) при выравнивании нуклеотидной последовательности ДНК GD-J-12.

куриная анемия

Агахан СМ; Abshar N; Fereidouni SRN; Marunesi C; Ходашенас М, 1994.Исследования вирусных инфекций птиц в Иране. Archives de l’Institut Razi, № 44/45: 1-10; 14 исх.

Al-Ankari AS; Awaad MHH; Эль-Шазли МО; Аль-Рамадан, Массачусетс, 1996. Вспышка вируса куриной анемии среди кур в Саудовской Аравии. Ветеринарный медицинский журнал Гиза, 44 (3): 557-562; 11 исх.

Amer HM; Эльзахед HM; Elabiare EA; Бадави А.А.; Юсеф А.А., 2011. Оптимизированный анализ полимеразной цепной реакции для выявления заражения вакцины птичьего вируса вирусом куриной анемии. Журнал ветеринарных диагностических исследований, 23 (1): 34-40.http://vdi.sagepub.com/content/23/1/34.full

Anon., 1997. XXXV заседание Итальянского общества болезней птиц — иммунодепрессивные факторы в птицеводстве, Форли, Италия, 10-11 октября 1996. Selezione Veterinaria, 8-9: 537-858.

Bhatt P; Шукла СК; Махендран М; Дхама К; Чавак ММ; Катария Дж. М., 2011. Распространенность вируса инфекционной анемии кур (CIAV) в коммерческих птицеводческих хозяйствах Северной Индии: серологическое исследование. Трансграничные и новые болезни, 58 (5): 458-460.http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1865-1682.2011.01215.x/abstract

Brentano L; Mores N; Венц I; Chandratilleke D; Щат К.А., 1991. Выделение и идентификация вируса инфекционной анемии кур в Бразилии. Болезни птиц, 35 (4): 793-800; 23 исх.

Buchholz U; Bülow Vvon, 1994. Характеристика белков вируса куриной анемии (CAV). Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 366-375; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 21 исх.

Buscaglia C; Crosetti CF; Nervi P, 1994. Выявление инфекционной анемии цыплят, выделение вируса и размножение болезни в Аргентине. Патология птиц, 23 (2): 297-304; 14 исх.

Bülow Vvon, 1988. Неудовлетворительная чувствительность и специфичность непрямых иммунофлуоресцентных тестов на наличие или отсутствие антител к возбудителю анемии цыплят (CAA) в сыворотках SPF и цыплят-бройлеров. Журнал ветеринарной медицины, B (Инфекционные заболевания, иммунология, гигиена пищевых продуктов, ветеринарное здравоохранение), 35 (8): 594-600; 19 исх.

Cardona CJ; Освальд ВБ; Щат К.А., 2000. Распространение вируса анемии цыплят в репродуктивных тканях цыплят, свободных от специфических патогенов. Журнал общей вирусологии, 81 (8): 2067-2075.

Chandratilleke D; О’Коннелл П; Щат К.А., 1991. Характеристика белков вируса инфекционной анемии кур с помощью моноклональных антител. Болезни птиц, 35 (4): 854-862; 22 исх.

Chen JL; Xin JQ; Песня XL; Zhou FH; Ван ZX; Zhang LB, 1999. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов шаньдунских изолятов вируса анемии цыплят.Китайский журнал ветеринарных наук и технологий, 29 (1): 18-20.

Chettle NJ; Эдди РК; Wyeth PJ; Lister SA, 1989. Вспышка заболевания, вызванного возбудителем куриной анемии, у цыплят-бройлеров в Англии. Ветеринарный журнал, 124 (9): 211-215; 28 исх.

Claessens JAJ; Schrier CC; Mockett APA; Jagt EHJM; Sondermeijer PJA, 1991. Молекулярное клонирование и анализ последовательности генома возбудителя куриной анемии. Журнал общей вирусологии, 72 (8): 2003-2006; 13 исх.

Коннор Т.Дж.; McNeilly F; Ферт GA; Макналти М.С., 1991.Биологическая характеристика австралийских изолятов возбудителя куриной анемии. Австралийский ветеринарный журнал, 68 (6): 199-201; 21 исх.

Coombes AL; Кроуфорд Г.Р., 1996. Вирус куриной анемии: краткий обзор. Журнал World’s Poultry Science Journal, 52 (3): 267-277; 56 исх.

Coombes AL; Crawford GR, 1998. Рекомендуемые условия хранения и реанимации клеточной линии MDCC-MSB1. Болезни птиц, 42 (1): 168-172; 7 исх.

Дуглас А.Дж.; Феникс К; Мауинни К.А.; Тодд Д; Mackie DP; Курран В.Л., 1995.Идентификация белка 24 кДа, экспрессируемого вирусом анемии цыплят. Журнал общей вирусологии, 76 (7): 1557-1562; 21 исх.

Drén C; Фаркас Т; Németh I, 1996. Серологическое исследование распространенности инфекции вирусом анемии цыплят в венгерских стадах кур. Ветеринарная микробиология, 50 (1/2): 7-16; 32 исх.

Drouin P; Picault JP; Plassiart G; Cherel Y; Toquin D; Toux TY; Guittet M; Bennejean G; Wyers M, 1992. Болезнь синего крыла у кур: первое сообщение во Франции. Recueil de Médecine Vétérinaire, 168 (5): 331-339; 49 исх.

Engström BE, 1999. Распространенность антител к вирусу куриной анемии (CAV) в шведских племенных стадах кур коррелировала со вспышками болезни синего крыла (BWD) у их потомства. Acta Veterinaria Scandinavica, 40 (2): 97-107; 44 исх.

Engström BE; Fossum O; Luthman M, 1988. Болезнь синего крыла цыплят: экспериментальное заражение шведским изолятом возбудителя куриной анемии и птичьим реовирусом. Патология птиц, 17 (1): 33-50; 19 исх.

Fadly AM; Motta JV; Виттер Р.Л .; Нордгрен Р.М., 1994.Эпидемиология вируса анемии цыплят в родительских стадах, свободных от специфических патогенов. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 447-455; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 14 исх.

Фаркас Т; Drén C; Немет I; Добош-Ковач М; Povazsán J; Sághy E, 1992. Выделение вируса анемии цыплят из цыплят-бройлеров. Acta Veterinaria Hungarica, 40 (3): 207-223; [6 пл.]; 36 исх.

Фаркас Т; Maeda K; Sugiura H; Кай К; Hirai K; Otsuki K; Хаяси Т., 1999.Серологическое исследование кур, японских перепелов, голубей, уток и ворон на антитела к вирусу куриной анемии (CAV) в Японии. Magyar állatorvosok Lapja, 121 (8): 456-458; [Статья впервые появилась в Avian Pathology (1998), vol. 27, нет. 3, pp. 316-320 (En)].

Фаркас Т; Povazsán J; Добош-Ковач М; Sághy E; Немет I; Drén C, 1991. Выделение вируса анемии цыплят от цыплят-бройлеров в Венгрии. Magyar állatorvosok Lapja, 46 (11): 661-668; 34 исх.

Ферт, Джорджия; Имаи К., 1990.Выделение возбудителя куриной анемии из австралийской птицы. Австралийский ветеринарный журнал, 67 (8): 301-302; 11 исх.

Goodwin MA; Браун J; Миллер С.И.; Смельцер М.А.; Steffens WL; Уолтман В.Д., 1989. Инфекционная анемия, вызванная парвовирусоподобным вирусом у бройлеров Джорджии. Болезни птиц, 33 (3): 438-445; 31 исх.

Goodwin MA; Steffens WL; Дэвис Дж. Ф.; Браун J; Латимер КС; Диксон Т.Г., 1991. Диагностика инфекций, вызванных так называемым возбудителем анемии цыплят: анемия и обнаружение вируса с помощью прямой трансмиссионной электронной микроскопии.Болезни птиц, 35 (4): 869-871; 25 исх.

Горё М; Suwa T; Мацумото S; Умемура Т; Itakura C, 1987. Серийное размножение и очистка агента куриной анемии в клеточной линии MDCC-MSB1. Патология птиц, 16 (1): 149-163; [7 рис.]; 18 исх.

Hermann J; Koski D; Тейлор С; Gatewood D, 2012. Оценка аналитической чувствительности анализа полимеразной цепной реакции для обнаружения вируса инфекционной анемии цыплят в птичьих вакцинах. Biologicals, 40 (4): 266-269. http: //www.sciencedirect.com / science / journal / 10451056

Обруч РК; Guscetti F; Келлер Б., 1992. Вспышка инфекционной анемии среди бройлеров в Швейцарии. Schweizer Archiv für Tierheilkunde, 134 (10): 485-489; 32 исх.

Jantosovic J; Конрад V; Кусев Дж; Скардова I; Varga G; Врабец В., 1992. Инфекционная анемия у кур. Veterinárství, 42 (10): 374-375.

Jeurissen SHM; Janse ME; Фургон Roozelaar DJ; Koch G; Boer GF de, 1992. Восприимчивость тимоцитов к инфекции вирусом куриной анемии связана с развитием до и после вылупления.Иммунология развития, 2: 123-129.

Jörgensen PH; Отте L; Bisgaard M; Nielsen OL, 1995. Сезонные колебания в заболеваемости субклинической горизонтальной инфекцией, передаваемой вирусом анемии цыплят, у датских бройлеров и родительских стад. Archiv für Geflügelkunde, 59 (3): 165-168; 11 исх.

Jörgensen PH; Отте L; Nielsen OL; Бисгаард М., 1994. Исследования эпидемиологии и экономических последствий заражения вирусом анемии цыплят у датских бройлеров и производителей бройлеров.Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 438-446; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 15 исх.

Jörgensen PH; Отте L; Nielsen OL; Бисгаард М., 1995. Влияние субклинических вирусных инфекций и других факторов на продуктивность стада бройлеров. British Poultry Science, 36 (3): 455-463; 11 исх.

Като А; Fujino M; Накамура Т; Ishihama A; Отаки Ю., 1995. Генная организация вируса анемии кур.Вирусология (Нью-Йорк), 209 (2): 480-488; 28 исх.

Koch G; Roozelaar DJvan; Verschueren CAJ; Eb AJvan der; Noteborn HM, 1995. Иммуногенные и защитные свойства белков вируса анемии цыплят, экспрессируемых бакуловирусом. Vaccine, 13 (8): 763-770; 37 исх.

Koch G; Roozelaar DJvan; Verschueren CAJ; Eb AJvan der; Noteborn MHM, 1994. Для образования нейтрализующих эпитопов вируса анемии цыплят необходим синтез его белков VP1 и VP2 в одной и той же клетке. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 498-506; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 29 исх.

Li XX; Сюй Вайоминг; Tang GY, 1994. Выделение и идентификация вируса куриной анемии и серологическое исследование в Китае. В кн .: Калета Э.Ф., под ред. Proceedings, International Symposium on Infectious Bursal Disease and Chicken Infective Anemia, Rauischholzhausen, Германия, 21-24 июня 1994 г., 429-433.

Lu YS; Tsai HJ; Кванг MJ; Tseng CS, 1993. Инфекционная анемия цыплят на Тайване: изоляция вируса и исследование антител.Журнал Китайского общества ветеринарных наук, 19 (3): 137-146; 30 исх.

Lucio B; Щат К.А.; Shivaprasad HL, 1990. Идентификация возбудителя куриной анемии, воспроизведение болезни и серологическое обследование в Соединенных Штатах. Болезни птиц, 34 (1): 146-153; 19 исх.

Lucio B; Щат К.А.; Taylor S, 1991. Прямое связывание протеина A, протеина G и конъюгатов анти-IgG с вирусом инфекционной анемии цыплят. Болезни птиц, 35 (1): 180-185.

Малкинсон М; Дэвидсон I; Вейсман Дж, 1990.Серологическое исследование антител к возбудителю анемии кур у домашней птицы в Израиле. Израильский журнал ветеринарной медицины, 45 (3): 188-189; [14-й симпозиум ветеринарной медицины, школа Корет, Израиль, 26-28 июня 1988 г.].

McNulty MS, 1991. Агент куриной анемии: обзор. Патология птиц, 20 (2): 187-203; 72 исх.

McNulty MS; Коннор TJ; McNeilly F; Киркпатрик К.С.; McFerran JB, 1988. Серологическое исследование домашней птицы в Соединенном Королевстве на предмет антител к возбудителю куриной анемии.Патология птиц, 17 (2): 315-324; [1 пл.]; 10 исх.

McNulty MS; Коннор TJ; McNeilly F; McLoughlin MF; Киркпатрик К.С., 1990. Предварительная характеристика изолятов возбудителя куриной анемии из Соединенного Королевства. Патология птиц, 19 (1): 67-73; 13 исх.

McNulty MS; Коннор TJ; McNeilly F; Спакман Д., 1989. Возбудитель куриной анемии в Соединенных Штатах: выделение вируса и обнаружение антител в родительских стадах бройлеров. Болезни птиц, 33 (4): 691-694; 17 исх.

McNulty MS; Макилрой С.Г.; Брюс DW; Тодд Д., 1991.Экономические последствия субклинической инфекции возбудителем анемии цыплят у цыплят-бройлеров. Болезни птиц, 35: 263-268.

Михан БМ; Тодд Д; Крилан JL; Эрл ЯП; Hoey EM; McNulty MS, 1992. Характеристика вирусных ДНК из клеток, инфицированных агентом куриной анемии: анализ последовательности клонированной репликативной формы и возможности трансфекции клонированных фрагментов генома. Архив вирусологии, 124 (3-4): 301-319; 39 исх.

Noteborn MHM; Бур-Гфде; Roozelaar DJvan; Карреман С; Краненбург О; Vos JG; Jeurissen SHM; Hoeben RC; Zantema A; Koch G; Ормонд Хван; Эб А. Джван дер, 1991.Характеристика клонированной ДНК вируса анемии цыплят, которая содержит все элементы инфекционного цикла репликации. Journal of Virology, 65 (6): 3131-3139; 52 исх.

Noteborn MHM; Кох Г., 1995. Инфекция вирусом анемии цыплят: молекулярные основы патогенности. Патология птиц, 24 (1): 11-31; 113 исх.

Noteborn MHM; Koch G; Eb AJvan der, 1994. Молекулярная биология вируса куриной анемии, введение. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 341-348; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 38 исх.

Noteborn MHM; Тодд Д; Verschueren CAJ; Gauw HWFMde; Curran WL; Veldkamp S; Дуглас Эй Джей; McNulty MS; Eb AJvan der; Koch G, 1994. Один белок вируса анемии цыплят индуцирует апоптоз. Журнал вирусологии, 68 (1): 346-351; 38 исх.

Новак Р; Mazija H; Ragland WL, 1996. Вирус анемии цыплят у бройлеров и их родителей в Хорватии. Ветеринарская Станица, 27 (6): 323-325; 11 исх.

O’Rourke D; Михальский В.П .; Багуст Т.Дж., 1994.Реакции ELISA на антитела к вирусу анемии цыплят: практический опыт и проблемы в птичьих стадах с высокой степенью защиты SPF. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 456-464; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 12 исх.

Otaki Y; Tajima M; Сайто К; Nomura Y, 1988. Иммунный ответ цыплят, инокулированных агентом куриной анемии отдельно или в комбинации с вирусом болезни Марека или вирусом герпеса индейки.Японский журнал ветеринарных наук, 50 (5): 1040-1047; 20 исх.

Ragland WL; Mazija H; Cvelic-Cabrilo V; Савич V; Новак Р; Pogacnik M, 1998. Подавление иммунитета [иммунизации против болезни Ньюкасла] коммерческих бройлеров в Хорватии, Словении и Боснии и Герцеговине с 1981 по 1991 год. Патология птиц, 27 (2): 200-204; 24 исх.

Rikula U, 1994. Вакцинация домашней птицы в Финляндии. Suomen Eläinlääkärilehti, 100 (12): 709-713; 5 исх.

Rozanah AS; Айни I; Аль-Аджили К.С.; Джалила А; Салим Н.Б., 1995.Обнаружение вируса анемии цыплят в стадах коммерческих кур в Малайзии. Jurnal Veterinar Malaysia, 7 (2): 77-79; 10 исх.

Rozypal TL; Skeeles JK; Dash JK; Андерсон Э.Дж.; Beasley JN, 1997. Идентификация и частичная характеристика арканзасских изолятов вируса куриной анемии. Болезни птиц, 41 (3): 610-616; 19 исх.

Sauvage V; Cheval J; Foulongne V; Gouilh MA; Pariente K; Manuguerra JC; Ричардсон Дж; Dereure O; Lecuit M; Burguiere A; Каро V; Элоит М., 2011. Идентификация первого гировируса человека, вируса, родственного вирусу куриной анемии.Журнал вирусологии, 85: 7948-7950.

Щат К.А., 1994. Влияние инфекции вирусом инфекционной бурсальной болезни или вирусом инфекционной анемии кур на иммунную систему птиц. Международный симпозиум по инфекционным заболеваниям брюшной полости и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 17-21; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 34 исх.

Щат К.А., 2009. Вирус анемии цыплят. Актуальные темы микробиологии и иммунологии, 331: 151-183.

Щат КА; Сантен В.Нван, 2008г.

Сон Хвану; Песня ЧангСон; Ким Джай Хонг; Kim SunJung, 1996. Обнаружение вируса инфекционной анемии цыплят с помощью полимеразной цепной реакции и окрашивания иммунопероксидазой с помощью моноклональных антител. Журнал сельскохозяйственных наук RDA, ветеринария, 38 (2): 699-706; 39 исх.

Станиславек В.Л., 1992. Агент куриной анемии (CAA) — взгляд Новой Зеландии. Публикация — Ветеринарное непрерывное образование, Университет Мэсси, № 147: 41-48; [Материалы курса Solvay по здоровью кур, Университет Мэсси, 1992]; 11 исх.

Stanislawek WL; Howell J, 1994. Выделение вируса анемии цыплят от цыплят-бройлеров в Новой Зеландии. Новозеландский ветеринарный журнал, 42 (2): 58-62; 14 исх.

Steenhuisen W; Jagt HJM; Schrier CC, 1994. Использование живой аттенуированной вакцины CAV в родительских стадах в Нидерландах. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 482-497; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов]; 4 исх.

Studdert MJ, 1993. Circoviridae: новые вирусы свиней, попугаев и кур. Австралийский ветеринарный журнал, 70 (4): 121-122; 13 исх.

Танигучи Т; Yuasa N; Maeda M; Horiuchi T, 1982. Гематопатологические изменения у мертвых и умирающих цыплят, вызванные возбудителем куриной анемии. Ежеквартальный отчет Национального института здоровья животных (Япония), 22: 61-69.

Танигучи Т; Yuasa N; Maeda M; Хориучи Т., 1983. Хронологические наблюдения за гематопатологическими изменениями у цыплят, привитых возбудителем куриной анемии.Ежеквартальный отчет Национального института здоровья животных, Япония, 23 (1): 1-12; 13 исх.

Tantaswasdi U; Sirivan P; Chaisingha A, 1996. Вирусологические и серологические исследования вируса куриной анемии в Таиланде. Журнал Тайской ветеринарной медицинской ассоциации, 47 (3/4): 45-56; 23 исх.

Тодд Д; Дуглас Эй Джей; Феникс КВ; Curran WL; Mackie DP; McNulty MS, 1994. Характеристика вируса куриной анемии. Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г., 349-363; [4-й симпозиум Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводов].

Тодд Д; Мауинни К.А.; Graham DA; Скотт ANJ, 1999. Разработка иммуноферментного анализа для серологической диагностики вируса куриной анемии. Журнал вирусологических методов, 82 (2): 177-184; 17 исх.

Тодд Д; Мауинни К.А.; McNulty MS, 1992. Обнаружение и дифференциация изолятов вируса анемии цыплят с помощью полимеразной цепной реакции. Журнал клинической микробиологии, 30 (7): 1661-1666; 17 исх.

Тодд Д; Niagro FD; Ричи Б.В.; Curran W; Аллан GM; Lukert PD; Латимер КС; Steffens WL; McNulty MS, 1991. Сравнение трех вирусов животных с кольцевыми одноцепочечными геномами ДНК. Архив вирусологии, 117 (1-2): 129-135; 17 исх.

Toro H; McNulty MS; Идальго H; Rosende S; Коннор Т.Дж., 1994. Обнаружение антител к вирусу анемии кур в четырех птицеводческих хозяйствах в Чили. Профилактическая ветеринария, 21 (1): 103-106; 12 исх.

Урданета ВШ; Андраде VLF; Парра О., 1998.Обнаружение анемии и сывороточных антител к вирусу анемии цыплят у бройлеров в городах Мара и Ла-Канада-де-Урданета, штат Сулия, Венесуэла. Revista Cientifica, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia, 8 (3): 265-272; 31 исх.

Venugopalan AT; Еланкумаран S; Raj GD; Manohar BM; Тангавелу А; Ravikumar G; Котесваран А; Радж А.С., 1994. Выделение вируса куриной анемии в Тамил Наду. Индийский ветеринарный журнал, 71 (4): 411-412; 8 исх.

Wicht СП; Махарадж С.Б., 1993.Возбудитель куриной анемии в ЮАР. Ветеринарный журнал, 133 (6): 147-148; 1 исх.

Yuasa N, 1983. Распространение и титрование инфекционности штамма Gifu-1 возбудителя куриной анемии в клеточной линии (MDCC-MSB1), полученной из лимфомы болезни Марека. Ежеквартальный отчет Национального института здоровья животных, Япония, 23 (1): 13-20; 18 исх.

Yuasa N; Имаи К., 1986. Патогенность и антигенность одиннадцати изолятов возбудителя куриной анемии (САА). Патология птиц, 15 (4): 639-645; 11 исх.

Yuasa N; Танигучи Т; Ёсида I, 1979 г.Выделение и некоторые характеристики возбудителя анемии у цыплят. Болезни птиц, 23 (2): 366-385.

Yuasa N; Йогучи Т; Furuta K; Йошида I, 1980. Материнские антитела и их влияние на восприимчивость цыплят к возбудителю куриной анемии. Болезни птиц, 24 (1): 202-209.

Заки ММ; Эль-Сануси А.А., 1994. Возбудитель анемии цыплят в Египте: I. Серологическое исследование антител против возбудителя анемии цыплят в некоторых коммерческих стадах цыплят с использованием непрямой иммунофлуоресцентной техники.Ветеринарный медицинский журнал Гиза, 42 (3): 53-58; 16 исх.

Zerihun Hailemariam; Омар А.Р .; Мохд Хаир-Беджо; Giap TanChing, 2008. Выявление и характеристика вируса анемии цыплят у коммерческих племенных цыплят-бройлеров. Журнал вирусологии, 5 (128): (27 октября 2008 г.). http://www.virologyj.com/content/5/1/128

Zhou WP; Шен Б; Ян Б; Хан SP; Wei L; Сяо БЖ; Чжоу Дж., 1997. Выделение и идентификация вируса инфекционной анемии кур в Китае. Болезни птиц, 41 (2): 361-364.

Ссылки на распространение

Агахан С. М., Абшар Н., Ферейдуни С. Р. Н., Марунеси С., Ходашенас М., 1994.Исследования вирусных инфекций птиц в Иране. Archives de l’Institut Razi. 1-10.

Аль-Анкари А.С., Аваад М. Х., Эль-Шазли М. О., Аль-Рамадан М. А., 1996. Вспышка вируса анемии цыплят среди кур в Саудовской Аравии. Ветеринарный медицинский журнал Гизы. 44 (3), 557-562.

Anon, 1997. Тростник-долгоносик сахарного тростника. Лучшие варианты управления повреждениями. В кн .: Бюро сахарных экспериментальных станций. Информационный бюллетень, Квинсленд, Австралия: 1-2.

Бхатт П., Шукла С. К., Махендран М., Дхама К., Чавак М. М., Катария Дж. М., 2011.Распространенность вируса инфекционной анемии кур (CIAV) в коммерческих птицеводческих хозяйствах Северной Индии: серологическое исследование. Трансграничные и новые болезни. 58 (5), 458-460. http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1865-1682.2011.01215.x/abstract DOI: 10.1111 / j.1865-1682.2011.01215.x

Brentano L, Mores N, Wentz I, Chandratilleke D, Schat KA, 1991. Выделение и идентификация вируса инфекционной анемии кур в Бразилии. Болезни птиц. 35 (4), 793-800. DOI: 10.2307 / 1591612

Бюлов фон, 1988.Неудовлетворительная чувствительность и специфичность непрямых иммунофлюоресцентных тестов на наличие или отсутствие антител к возбудителю анемии цыплят (САА) в сыворотках SPF и цыплят-бройлеров. Журнал ветеринарной медицины, B (инфекционные заболевания, иммунология, пищевая гигиена, ветеринарное здравоохранение). 35 (8), 594-600.

Buscaglia C, Crosetti C F, Nervi P, 1994. Выявление инфекционной анемии цыплят, выделение вируса и размножение болезни в Аргентине. Патология птиц.23 (2), 297-304. DOI: 10.1080 / 03079459408418997

CABI, без даты. Компендиум CABI: Статус определен в результате регионального распространения. Уоллингфорд, Великобритания: CABI

CABI, без даты а. Компендиум CABI: Статус определяется редактором CABI. Валлингфорд, Великобритания: CABI

Chen JiangLi, Xin JiuQing, Song XiuLong, Zhou FangHong, Wang ZhengXiu, Zhang LiBen, 1999. Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов шаньдунских изолятов вируса анемии цыплят. Китайский журнал ветеринарных наук и технологий.29 (1), 18-20.

Четтл Н. Дж., Эдди Р. К., Уайет П. Дж., Листер С. А., 1989. Вспышка болезни, вызванной возбудителем анемии цыплят, у цыплят-бройлеров в Англии. Ветеринарная запись. 124 (9), 211-215.

Коннор Т. Дж., МакНилли Ф., Ферт Г. А., МакНалти М. С., 1991. Биологическая характеристика австралийских изолятов возбудителя куриной анемии. Австралийский ветеринарный журнал. 68 (6), 199-201. DOI: 10.1111 / j.1751-0813.1991.tb03192.x

Drén C, Farkas T, Németh I, 1996. Серологическое исследование распространенности инфекции вирусом анемии цыплят в венгерских стадах кур.Ветеринарная микробиология. 50 (1/2), 7-16. DOI: 10.1016 / 0378-1135 (96) 00002-8

Drouin P, Picault JP, Plassiart G, Cherel Y, Toquin D, Toux TY, Guittet M, Bennejean G, Wyers M, 1992. Болезнь синего крыла у кур: первый отчет во Франции. (La maladie des ailes bleues chez le poulet. Премьерные наблюдения во Франции.) Recueil de Médecine Vétérinaire. 168 (5), 331-339.

Engström B.E., 1999. Распространенность антител к вирусу анемии цыплят (CAV) в шведских племенных стадах кур коррелировала со вспышками болезни синего крыла (BWD) в их потомстве.Acta Veterinaria Scandinavica. 40 (2), 97-107.

Фаркаш Т., Дрен С., Немет И., Добош-Ковач М., Повацан Дж., Саги Е., 1992. Выделение вируса анемии цыплят из цыплят-бройлеров. Acta Veterinaria Hungarica. 40 (3), 207-223.

Фаркаш Т., Поважан Дж., Добош-Ковач М., Саги Е., Немет И., Дрен С., 1991. Выделение вируса анемии цыплят от цыплят-бройлеров в Венгрии. (Csirkeanaemia-vírus izolálása brojlercsirkékből Magyarországon.). Magyar Állatorvosok Lapja. 46 (11), 661-668.

Ферт Г. А., Имаи К., 1990.Выделение возбудителя куриной анемии из австралийской птицы. Австралийский ветеринарный журнал. 67 (8), 301-302. DOI: 10.1111 / j.1751-0813.1990.tb07802.x

Гудвин М. А., Браун Дж., Миллер С. И., Смелтцер М. А., Стеффенс В. Л., Уолтман В. Д., 1989. Инфекционная анемия, вызванная парвовирусоподобным вирусом у бройлеров Джорджии. Болезни птиц. 33 (3), 438-445. DOI: 10.2307 / 1591102

Hoop R K, Guscetti F, Keller B, 1992. Вспышка инфекционной анемии среди бройлеров в Швейцарии. (Ein Ausbruch von Infktiöser Kükenanämie bei Mastküken in der Schweiz.). Schweizer Archiv für Tierheilkunde. 134 (10), 485-489.

Янтошович Дж, Конрад В., Кушев Дж., Шкардова И., Варга Г., Врабец В., 1992. Инфекционная анемия у кур. (Инфекционная анемия курч.). Veterinářství. 42 (10), 374-375.

Йоргенсен П. Х., Отте Л., Бисгаард М., Нильсен О. Л., 1995. Сезонные колебания в заболеваемости субклинической горизонтально передаваемой инфекцией вируса анемии цыплят у датских бройлеров и производителей бройлеров. Archiv für Geflügelkunde. 59 (3), 165-168.

Йоргенсен П. Х., Отте Л., Нильсен О. Л., Бисгаард М., 1994.Исследования эпидемиологии и экономического воздействия вируса анемии цыплят на датских бройлеров и производителей бройлеров. В: Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г. [Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г.], Гиссен , Германия: Institut für Geflügelkrankheiten. 438-446.

Лу И С, Цай Х Дж, Кванг М Дж, Ценг С., 1993.Инфекционная анемия кур на Тайване: изоляция вируса и исследование антител. Журнал Китайского общества ветеринарных наук. 19 (3), 137-146.

Лусио Б., Шат К. А., Шивапрасад Х. Л., 1990. Идентификация возбудителя куриной анемии, воспроизведение болезни и серологическое обследование в Соединенных Штатах. Болезни птиц. 34 (1), 146-153. DOI: 10.2307 / 1591346

Малкинсон М., Дэвидсон И., Вейсман Дж., 1990. Серологическое исследование антител к возбудителю анемии цыплят у домашней птицы в Израиле.В: Израильский журнал ветеринарной медицины, 45 (3) 188-189.

МакНалти М. С., Коннор Т. Дж., МакНилли Ф., Киркпатрик К. С., Макферран Дж. Б., 1988. Серологическое исследование домашней птицы в Соединенном Королевстве на предмет антител к возбудителю куриной анемии. Патология птиц. 17 (2), 315-324. DOI: 10.1080 / 03079458808436450

Новак Р., Мазия Х., Рагланд В. Л., 1996. Вирус анемии цыплят у бройлеров и их родителей в Хорватии. (Вирус zarazne anemije u kokoši i tovnih pilića u hrvatskoj.). Veterinarska Stanica.27 (6), 323-325.

Рагланд В.Л., Мазия Х., Цвелич-Чабрило В., Савич В., Новак Р., Погачник М., 1998. Подавление иммунитета [к иммунизации против болезни Ньюкасла] коммерческих бройлеров в Хорватии, Словении и Боснии и Герцеговине с 1981 по 1991 год. Avian Патология. 27 (2), 200-204. DOI: 10.1080 / 03079459808419324

Rikula U, 1994. Вакцинация домашней птицы в Финляндии. (Siipikarjan rokottaminen Suomessa.). Suomen Eläinlääkärilehti. 100 (12), 709-713.

Розана А. С., Айни I, Аль-Аджили К. С., Джалила А., Салим Н. Б., 1995.Обнаружение вируса анемии цыплят в стадах коммерческих кур в Малайзии. Jurnal Veterinar Malaysia. 7 (2), 77-79.

Розипал Т. Л., Скилз Дж. К., Дэш Дж. К., Андерсон Е. Дж., Бисли Дж. Н., 1997. Идентификация и частичная характеристика изолятов вируса анемии кур из штата Арканзас. Болезни птиц. 41 (3), 610-616. DOI: 10.2307 / 1592152

Сон Хван Ву, Сон Чанг Сон, Ким Джай Хонг, Ким Сон Джунг, 1996. Обнаружение вируса инфекционной анемии цыплят с помощью полимеразной цепной реакции и иммунопероксидазного окрашивания моноклональным антителом.Журнал RDA сельскохозяйственных наук, ветеринарии. 38 (2), 699-706.

Станиславек В. Л., 1992. Агент куриной анемии (CAA) — взгляд Новой Зеландии. Публикация — Ветеринарное непрерывное образование, Университет Мэсси. 41-48.

Станиславек В. Л., Хауэлл Дж., 1994. Выделение вируса куриной анемии от цыплят-бройлеров в Новой Зеландии. Новозеландский ветеринарный журнал. 42 (2), 58-62.

Steenhuisen W, Jagt H.JM, Schrier C.C, 1994. Использование живой ослабленной вакцины CAV в родительских стадах в Нидерландах.В: Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г. [Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г.], Гиссен , Германия: Institut für Geflügelkrankheiten. 482-497.

Tantaswasdi U, Sirivan P, Chaisingha A, 1996. Вирусологические и серологические исследования вируса куриной анемии в Таиланде. Журнал Тайской ветеринарной медицинской ассоциации.47 (3/4), 45-56.

Торо Х., МакНалти М. С., Идальго Х., Розенде С., Коннор Т. Дж., 1994. Обнаружение антител к вирусу анемии цыплят в четырех птицеводческих хозяйствах Чили. Профилактическая ветеринария. 21 (1), 103-106. DOI: 10.1016 / 0167-5877 (94)

-3

Urdaneta VSH, Andrade VLF, Parra O, 1998. Обнаружение анемии и сывороточных антител к вирусу куриной анемии у бройлеров в городах Мара и Ла-Каньяда-де-Урданета, Сулия Штат Венесуэла. (Detección de anemia y anticuerpos séricos a anemia infcciosa aviar en pollos de engorde en los municipios Mara y La Cañada de Urdaneta del Estado Zulia.). Revista Cientifica, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Zulia. 8 (3), 265-272.

Венугопалан А. Т., Эланкумаран С., Радж Г. Д., Манохар Б. М., Тангавелу А., Равикумар Г., Котесваран А., Радж А. С., 1994. Выделение вируса куриной анемии в Тамил Наду. Индийский ветеринарный журнал. 71 (4), 411-412.

Wicht J. V, Maharaj S. B., 1993. Возбудитель куриной анемии в Южной Африке. Ветеринарный журнал, 133 (6), 147-148.

Xiao Xin Li, Wei Yan Xu, Gui Yun Tang, 1994. Выделение и идентификация вируса куриной анемии и серологическое исследование в Китае.В: Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии кур, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г. [Международный симпозиум по инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят, Рауишхольцхаузен, Германия, 21-24 июня 1994 г.], Гиссен , Германия: Institut für Geflügelkrankheiten. 429-433.

Yuasa N, Taniguchi T, Yoshida I, 1979. Выделение и некоторые характеристики возбудителя, вызывающего анемию у цыплят. Болезни птиц. 23 (2), 366-385. DOI: 10.2307 / 1589567

Заки М. М., Эль-Сануси А. А, 1994.Возбудитель куриной анемии в Египте: I. Серологическое исследование антител против возбудителя куриной анемии в некоторых коммерческих стадах цыплят с использованием непрямой иммунофлуоресцентной техники. Ветеринарный медицинский журнал Гизы. 42 (3), 53-58.

Чжоу ВэньПин, Шен Бинг, Ян Бинг, Хан Супин, Вэй Ли, Сяо БаоЧжэнь, Чжоу Цзяо, 1997. Выделение и идентификация вируса инфекционной анемии кур в Китае. Болезни птиц. 41 (2), 361-364. DOI: 10.2307 / 1592190

научных статей, журналов, авторов, подписчиков, издателей

Как крупный международный издатель
академических и исследовательских журналов Science Alert издает
и разрабатывает названия в партнерстве с самыми
престижные научные общества и издатели.Наша цель
заключается в том, чтобы максимально широко использовать качественные исследования.
аудитория.
Мы прилагаем все усилия, чтобы поддержать исследователей
которые публикуют в наших журналах. Есть масса информации
здесь, чтобы помочь вам публиковаться вместе с нами, а также ценные
услуги для авторов, которые уже публиковались у нас.
2021 цены уже доступны. Ты
может получить личную / институциональную подписку перечисленных
журналы прямо из Science Alert. В качестве альтернативы вы
возможно, пожелает связаться с выбранным вами агентством по подписке.
Направляйте заказы, платежи и запросы в службу поддержки.
в службу поддержки клиентов журнала Science Alert.
Science Alert гордится своей
тесные и прозрачные отношения с обществом. В виде
некоммерческий издатель, мы стремимся к самому широкому
возможное распространение публикуемых нами материалов и
на предоставление услуг высочайшего качества нашим
издательские партнеры.
Здесь вы найдете ответы на наиболее часто задаваемые вопросы (FAQ), которые мы получили по электронной почте или через контактную форму в Интернете.В зависимости от характера вопросов мы разделили часто задаваемые вопросы на разные категории.
Азиатский индекс научного цитирования (ASCI)
стремится предоставить авторитетный, надежный и
значимая информация по освещению наиболее важных
и влиятельные журналы для удовлетворения потребностей мировых
научное сообщество.База данных ASCI также предоставляет ссылку
к полнотекстовым статьям до более чем 25000 записей с
ссылка на цитированные ссылки.

Сопутствующие инфекции инфекционной анемии цыплят и инфекционной бурсальной болезни у пятинедельных молодок в Джосе, штат Плато, Нигерия

Сопутствующие инфекции инфекционной анемии цыплят и инфекционной бурсальной болезни у пятинедельных молодок в Джосе, штат Плато, Нигерия

Адедеджи А.J1 *, Сати N.M1, Pewan S..B1, Ogbu K.I2, Adole J.A, Lazarus D.D1, Ijiwo S.J4, Okpanachi A3, Nwagbo I.O1, Joannis, T.M1 и Abdu P.A3

1 Национальный институт ветеринарных исследований, Вом, Нигерия; 2Федеральный колледж ветеринарии и производственных технологий, Вом, Нигерия; 3Факультет ветеринарной медицины, Национальный институт ветеринарных исследований, Вом, Нигерия, Университет Ахмаду Белло, Зария, Нигерия; 4 Университет Абубакара Тафава Балева, Баучи, Нигерия.

Редактор | Мухаммад Абубакар, Национальные ветеринарные лаборатории, Парк-роуд, Исламабад, Пакистан.

Поступило | 01 сентября 2016 г .; Принято | 10 октября 2016 г .; Опубликовано | 20 октября 2016 г.

* Переписка | Адедеджи А.Дж., Национальный институт ветеринарных исследований, Вом, Нигерия; Электронная почта: [email protected]

Цитирование | Адедеджи, А.Дж., Н.М. Сати, С.Б. Певан, К. Огбу, Дж. Адол, Д. Лазарь, С.Дж. Идживо, А. Окпаначи, И.О. Нвагбо, Т. Джоаннис и П.А. Абду. 2016. Сопутствующие инфекции инфекционной анемии цыплят и инфекционной бурсальной болезни у 5-недельных молодок в Джосе, штат Плато, Нигерия.Ветеринарные науки: исследования и обзоры, 2 (3): 60-65.

DOI | http://dx.doi.org/10.17582/journal.vsrr/2016.2.3.60.65

Введение

Инфекционная анемия цыплят (ИАК) — это вирусное заболевание кур, которое вызывает апластическую анемию и атрофию тимуса (McNulty, 1997; Smyth and Schat, 2013). Вирус куриной анемии (CAV) этиология ЦРУ был впервые обнаружен при исследовании зараженной вакцины против болезни Марека (MD) в 1979 году (Yuasa et al., 1979).Вирус куриной анемии принадлежит к роду Circovirus семейства Circoviridae и представляет собой небольшой, икосаэдрический и очень стабильный ДНК-вирус без оболочки, который передается вертикально и горизонтально (McNulty and Todd, 2008; Smyth and Schat, 2013). Клинические признаки ЦРУ включают депрессию, нежелание двигаться, взъерошенные перья, опущенные крылья и бледность гребней, клювов и слизистых оболочек. За последние три десятилетия ЦРУ превратилось в новое экономически важное заболевание, связанное с иммуносупрессией и субклиническим заболеванием, приводящим к усилению инфицирования вторичными вирусными, бактериальными или грибковыми агентами (Oluwayelu, 2010).Иммуносупрессия в результате CAV-инфекции также может привести к неудачам вакцинации из-за плохого ответа на вакцинацию в результате повреждения костного мозга и предотвращения регенерации лимфоидных органов (Haridy et al., 2009; Oluwayelu, 2010). Экономические потери из-за CAV-инфекций возникают из-за плохого роста, повышенной смертности и стоимости антибиотиков, используемых для борьбы с вторичными бактериальными инфекциями (McNulty, 1991). Сообщалось, что чистый доход на 1000 голов, коэффициент конверсии корма и средний вес на птицу были ниже в стадах с антителами к CAV по сравнению с группами без них (Oluwayelu, 2010).В другом отчете наблюдалась потеря чистой прибыли примерно на 18,5% из-за снижения веса при переработке и увеличения смертности у CAV-инфицированных птиц (McIlroy et al. 1992).

Инфекционная бурсальная болезнь (ВЗК) — это острое высококонтагиозное вирусное заболевание, вызываемое в основном молодыми цыплятами, с высокой заболеваемостью и смертностью, вызываемой вирусом ВЗК (IBDV). IBDV — это двухцепочечный РНК-вирус, принадлежащий к роду Avibirnavirus в семействе Birnaviridae (Rosenberger et al., 2008; Dolz and Majo, 2013).Впервые о нем было сообщено в начале 1960-х годов в Соединенных Штатах Америки (Dolz and Majo, 2013). В последние годы появились острые формы заболевания, разрушительно сказавшиеся на птицеводстве (Dolz, Majo, 2013). Фактически, IBD представляет собой серьезную угрозу для птицеводства во всем мире (van den Berg, 2000; Dolz and Majo, 2013). Вирус передается горизонтально оральным или респираторным путем при прямом контакте с инфицированными цыплятами или при прямом контакте с зараженными фомитами (Dolz and Majo, 2013).Клинические признаки ВЗК включают анорексию, взъерошенные перья, диарею, прострацию и смерть (Dolz and Majo, 2013).

Материалы и методы

История болезни

В мае 2014 г. смертность была зарегистрирована у 5 000 5-недельных молодок с коммерческой птицефабрики в Джосе. Смертность наблюдалась в одном из семи загонов на участке выращивания. Птицы не кормили и сбились в кучу. Это были Хай-Лайн и Айза Браун. Птицы были вакцинированы против IBD в 9 и 21 день и против болезни Ньюкасла (ND) в 16-дневном возрасте.Анамнез также показал, что на ферме была зарегистрирована вспышка ВЗК в феврале 2014 года. Клиническими признаками, наблюдаемыми после посещения фермы, были прострация, взъерошенные перья, зеленовато-желтоватая диарея, анорексия и заболеваемость более 80%. Смертность регистрировалась между 1 и 6 днями появления клинических признаков, и 79,12% (3956) птиц умерли от болезни (рис. 1, 2 и 3).

Результаты патологоанатомического исследования

Патологоанатомическое исследование выявило экхимотические кровоизлияния в мышцах груди и бедра, кровоизлияния в области соединения преджелудка и желудка, сильно увеличенный и геморрагический BF и увеличенную селезенку (рис. 4, 5 и 6).Бурса Фабрициуса была получена для лабораторной диагностики.

Обработка Бурсы Фабрициуса

Бурсы Фабрициуса (BF) мертвых цыплят с фермы были извлечены и хранились при -20 ° C в лаборатории в течение четырех месяцев, пока они не были обработаны. BF гомогенизировали с помощью ступки и пестика. Забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) (pH 7,4) добавляли к гомогенизированному BF в соотношении 1 мл PBS к 1 грамму BF и центрифугировали при 3000 об / мин в течение 10 минут.Супернатант сливали в бутыль для образцов и хранили в морозильной камере. Осадок смешивали с 10% формалином и сбрасывали в печь для сжигания. Тест иммунодиффузии в агаровом геле (AGID) использовали для обнаружения антигенов IBDV и ПЦР для CAV.

Тест иммунодиффузии в агар-геле (AGID)

Антигены IBD были обнаружены с помощью теста AGID. Образцы помещали в лунки против антигена IBDV. 25 мкл сыворотки помещали в периферические лунки против 25 мкл антигена IBD в центральные лунки и инкубировали во влажной камере в течение 3 дней при комнатной температуре (22-30 ° C).Положительными на антитела к IBD были лунки с линиями преципитина между центральными лунками, содержащими антиген IBD, и периферическими лунками, содержащими сыворотку (OIE, 2008).

Экстракция ДНК для ПЦР

ДНК

экстрагировали из гомогената ткани с использованием мини-экстракции ДНК QIAamp® (QIAGEN, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. До использования ДНК хранили при -20 ° C.

Полимеразная цепная реакция

Полимеразную цепную реакцию

проводили для амплификации области 186 п.н. высококонсервативного гена, кодирующего VP2 CAV.Использовались следующие праймеры: 5 ’GCA GTA GGT ATA CGC AAG GC 3’ (прямой) и 5 ​​’CTG AAC GTT GAT GGT C 3’ (обратный), и были синтезированы, как опубликовано Eltahir et al. (2011). Реакцию проводили в реакционном объеме 50 мкл, состоящем из 2 мкл ДНК, 5 мкл 10-кратного реакционного буфера (трис-соляная кислота), 2 мМ dNTP, 1,8 мМ MgCl2, 1 ед. ДНК-полимеразы Taq, 20 пмоль каждого праймера. , и вода, свободная от нуклеаз. Реакции в термоциклере для ПЦР (GeneAmp, Applied Biosystem, США) состояли из денатурации в течение 2 минут при 94 ° C с последующими 35 циклами денатурации в течение 30 секунд при 94 ° C, отжига в течение 30 секунд при 60 ° C и удлинения в течение 1 минуты. при 72 ° С.После окончательного удлинения при 72 ° C в течение 7 мин образцы выдерживали при 4 ° C.

Результаты

Тест иммунодиффузии в агар-геле (AGID)

Антиген против IBDV был обнаружен с помощью AGID (фиг. 7). Линия преципитации была видна на положительном контроле (+ ve) и образцах, обозначенных A. Линия вокруг отрицательного контроля (-ve) отсутствовала. Образец сумки, проверенный на антиген IBDV, был положительным, на что указывало присутствие линии преципитина (фигура 7).

Обнаружение ДНК вируса куриной анемии в бурсе Фабрициуса методом ПЦР

Анализ с помощью электрофореза в агаровом геле показал единственный фрагмент ДНК размером 186 п.н., полученный из ДНК, экстрагированной из бурсы, подвергнутой ПЦР-амплификации (фиг. 8).Размер продукта ПЦР на дорожке 1 и дорожке 2, которые представляют собой образцы ДНК, был таким же, как продукт положительного контроля CAV на дорожке 3. Лестница составляла 50 пар оснований.

Обсуждение

Сопутствующие инфекции КАВ и других болезней домашней птицы распространены в коммерческих птицеводческих хозяйствах, а птицы в условиях интенсивного выращивания уязвимы для иммуносупрессии (Hoerr, 2010; Smyth and Schat, 2013). Эпидемиологические данные показывают, что CAV и IBDV вызывают проблемы на коммерческих птицеводческих фермах, несмотря на материнский иммунитет и вакцинацию (Toro et al., 2009). Вирус куриной анемии и IBDV устойчивы к химическим и физическим агентам, вирусы сохраняются в помещениях птицефабрики и, следовательно, затрудняют борьбу с ними (Schat and van Santen, 2008; Toro et al., 2009). В этом отчете ЦРУ изначально не было дифференциальным диагнозом, потому что клинические признаки и крупные поражения сильно указывали на ВЗК, что отвлекло внимание врача от возможной одновременной вспышки ЦИА и ВЗК. При очень вирулентной ВЗК (vvIBD) обычно наблюдаются сильно воспаленный и геморрагический БФ и кровоизлияния в соединении преджелудка и желудка (Smyth and Schat, 2013; Abdu, 2014).Сходство клинических проявлений CIA и IBD, основанное на возрасте пораженных птиц, клинических признаках и крупных поражениях, затрудняет диагностику CIA в полевых условиях в случае коинфекции IBD без лабораторного скрининга, как первоначально было описано в этом отчете (Adair, 2000). ). Кроме того, полевые вспышки с участием молодых цыплят с признаками взъерошенных перьев, депрессии, грубых мышечных кровоизлияний и высокой смертности связаны только с ВЗК, что приводит к возможной ошибочной диагностике только ЦИА или сочетанной инфекции с ВЗК (Oluwayelu et al., 2005; Смит и Шат, 2013). Кровоизлияния, наблюдаемые у кур с ВЗК, в некоторых случаях могут быть следствием КАВ, а не только инфекции ВБК (Schat and van Santen 2008).

Обнаружение КАВ в этом отчете о случае было проведено ретроспективно с использованием ПЦР из-за истории повторяющихся и тяжелых вспышек ВЗК на ферме, несмотря на все необходимые вакцинации и меры биобезопасности, принятые фермером для предотвращения таких вспышек. Из предыдущих отчетов в Нигерии, КАВ был ретроспективно обнаружен с помощью ПЦР и изолирован от случаев, изначально диагностированных только как ВЗК (Oluwayelu et al., 2005; Олувайелу, 2010; Owoade et al., 2010). Аналогичным образом, исследование, проведенное в Зарии (Нигерия) и окрестностях, показало, что 57,4% цыплят, протестированных на антитела к CIA, были положительными, а 38,3% были серопозитивными на антитела как CIA, так и IBD (Okpanachi, 2015). Приведенные выше отчеты дополнительно проясняют тот факт, что CAV циркулирует в стадах домашней птицы в Нигерии, но CIA обычно не диагностируется в полевых условиях.

Высокая заболеваемость и смертность стада в этом отчете может быть результатом иммуносупрессии, вызванной субклинической инфекцией CAV, которая усугубила инфекцию IBDV в стае, хотя птицы были вакцинированы против IBD, они не тестировались после вакцинации, чтобы определить, была ли вакцинация предоставил иммунитет против IBD.Сообщалось об увеличении заболеваемости и смертности при сопутствующих инфекциях CAV с IBDV в результате индуцированной вирусом иммуносупрессии (Schat and van Santen 2008; Hoerr, 2010). Экспериментально было продемонстрировано, что вирус куриной анемии усиливает патогенность вирусов IBD, MD и ND (Adair, 2000; Smyth and Schat, 2013). Исследования также показали, что существует синергетический эффект между CAV и IBDV, и оба вируса усиливают действие друг друга, предотвращая иммунный ответ птиц (Toro et al., 2009; Хёрр, 2010).

Заключение и рекомендации

Это подтвержденный случай CIA и IBD в стае и первый отчет о естественном сочетанном заражении CAV и IBDV у промышленных молодок в Нигерии. На других птицеводческих фермах рекомендуются улучшенные методы биобезопасности для предотвращения коинфекции CAV и IBDV. Заводчиков следует вакцинировать против CIA, чтобы предотвратить передачу CAV, но одновременно разрешить передачу материнских антител их потомству.Клиницисты в этой области должны также и всегда включать CIA в качестве дифференциального диагноза IBD. Рекомендуется провести национальный эпиднадзор для определения правильного и текущего статуса инфекции CIA в Нигерии и штаммов IBDV, вызывающих заболевание в исходе.

Благодарность

Мы выражаем признательность Национальному институту ветеринарных исследований, Вом, Нигерия, где был проведен лабораторный анализ. Мы также хотели бы поблагодарить г-на Исмаила Шитту, который пожертвовал праймеры, использованные для ПЦР, мисс Ннека Чима, Дайка Йоханна Дайек и Адриана Магуду, которые помогли с лабораторным анализом.

Конфликт интересов

В этом исследовании нет конфликта интересов.

Авторский вклад

APA, AAJ, PSB, ISJ и JTM разработали работу, провели полевые работы и собрали образцы, AJA, NIO, OA провели лабораторные исследования, APA, AAJ, SNM, OKI, LDD и NIO написали рукопись и все прочитали и одобрил рукопись.

Список литературы

  • • Абду П.А. 2014. Болезнь Гамборо.Руководство по основным болезням домашней птицы в Нигерии, 3-е издание, 5 и 6 Ventures, стр. 16-30.
  • • Адэр, Б.М. Иммунопатогенез вирусной инфекции куриной анемии. Развитие и сравнительная иммунология, 2000; 24: 247-255. https://doi.org/10.1016/S0145-305X(99)00076-2
  • • Dolz, R. and Majo. Н. 2013. Вирус-индуцированная иммуносупрессия: Инфекционная бурсальная болезнь. В: Иммуосупрессивные болезни домашней птицы (ред. Гимено, И. М.), Grupo Asis Biomedia, Zazagoza. С. 67-87.
  • • Эльтахир, Ю.М., Цянь, К., Цзинь, В., Ван, П., Цинь, А. Молекулярная эпидемиология вируса анемии кур на коммерческих фермах в Китае. Журнал вирусологии, 2011; 8: 145. https://doi.org/10.1186/1743-422X-8-145
  • • Хариди, М., Горё, М., Сасаки, Дж., Окада, К. Патологическое и иммуногистохимическое исследование цыплят с коинфекцией вируса болезни Марека и вируса анемии цыплят. Патология птиц, 2009; 38: 469-483. https://doi.org/10.1080/03079450

    9162

  • • Hoerr, F. J. Клинические аспекты иммуносупрессии у домашней птицы.Болезни птиц, 2010; 54: 2-12. https://doi.org/10.1637/8909-043009-Review.1
  • • Имаи, К., Мейс, М., Цукамото, К., Хихара, Х. и Юаса, Н. Стойкая инфекция вирусом куриной анемии и некоторые эффекты инфицирования вирусом высоковирулентной инфекционной бурсальной болезни на ее стойкость. Исследования в области ветеринарии, 1999; 67: 233-238. https://doi.org/10.1053/rvsc.1999.0313
  • • Макилрой, С.Г., МакНалти, М.С., Брюс, Д.У., Смит, Дж. А., Гудолл, Е.А. и Алкорн, М.Дж.Экономические последствия клинической инфекции возбудителя куриной анемии для прибыльного производства бройлеров.Болезни птиц, 1992; 36: 566-574. https://doi.org/10.2307/1591750
  • • МакНалти, М.С. Возбудитель куриной анемии: обзор. Патология птиц, 1991; 20: 187-203. https://doi.org/10.1080/03079459108418756
  • • МакНалти, M.S. Вирус куриной анемии — взгляд в будущее. Британская птицеводческая наука, 1997: 38: 7-13. https://doi.org/10.1080/00071669708417935
  • • МакНалти, M.S. и Тодд, Д. 2008. Вирус куриной анемии. В: Лабораторное руководство по изоляции и идентификации птичьих патогенов (ред.Завала, Л.Д., Д.Е. Суэйн, Дж.Р. Глиссон, Дж. Э. Пирсон, У. Рид, М.В. Джеквуд и Вулкок) 5-е изд. Американская ассоциация птичьих патологов, Джеконвилл, Флорида, стр. 124–127.
  • • МЭБ. 2008. Всемирная организация здоровья животных: Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных. Инфекционная бурсальная болезнь (болезнь Гамборо), Париж, стр. 549-565.
  • • Окпаначи, А.А. 2015. Обследование на инфекционную анемию кур и инфекционную бурсальную болезнь в Зарии и окрестностях, штат Кадуна, Нигерия.Диссертация на соискание степени магистра, Университет Ахмаду Белло, Зария, Нигерия, стр. 82.
  • • Олувайелу, Д.О. Диагностика и эпидемиология инфекционной анемии кур в Африке. Африканский журнал биотехнологии, 2010 г .; 9 (14): 2043-2049.
  • • Олувайелу, Д.О., Тодд, Д., Болл, Н. У., Скотт А. Н. Дж., Оладеле, О. А., Эмикпе, Б. О., Фагбохун, О. А., Овоад, А. А., Олалай, О. Д. Выделение и предварительная характеристика вируса анемии цыплят от цыплят в Нигерии. Болезни птиц, 2005 г .; 49: 446-450. https: // doi.org / 10.1637 / 7339-020705R.1
  • • Owoade, A.A., Iyiola, S.H., Oni, O.O. Сообщение о смешанном заражении вирусами инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят. Журнал естественных наук, инженерии и технологий, 2010; 9 (1): 1-5.
  • • Rosenberger, J.K. Саиф М.Ю., Джеквуд Д.Дж., 2008. Вирус куриной анемии. В: Лабораторное руководство по изоляции и идентификации птичьих патогенов (ред. Завала, Л. Д., Д. Е. Суэйн, Дж. Р. Глиссон, Дж. Э. Пирсон, В. М. Рид, М.W. Jackwood and Woolcock) 5-е изд. Американская ассоциация птичьих патологов, Джеконвилл, Флорида, стр. 188-194.
  • • Шат, К., А., Скиннер, М.А. 2008. Иммунодепрессивные заболевания птиц и уклонение от иммунитета. В: Иммунология птиц, Academic Press, Elsevier, стр. 299-329. https://doi.org/10.1016/B978-012370634-8.50019-6
  • • Щат К.А. и ван Сантен, В. 2008. Инфекционная анемия цыплят. В: Болезни домашней птицы (ред. Саиф Ю.М., А.М. Фадли, Дж. Р. Глиссион, Л. Р. Макдугалд, Л.Нолан и Д. Суэйн), 12-е изд., Blackwell Publishing, Эймс, Айова, США, стр. 211-236.
  • • Смит, Дж. А. и Щат К.А. 2013. Вирус-индуцированная иммуносупрессия: инфекционная анемия цыплят. В: Иммуосупрессивные болезни домашней птицы (изд. Gimeno, I.M), Grupo Asis Biomedia, Zazagoza, стр. 91–114.
  • • Торо, Х., Ван Сатен, В.Б., Хёрр, Ф.Дж., Бридлав, С. Воздействие вируса куриной анемии и вируса инфекционной бурсальной болезни на коммерческих кур. Болезни птиц, 2009 г .; 53 (1): 94-102.https://doi.org/10.1637/8455-082208-Reg.1
  • • van den Berg, T.P. Острая инфекционная бурсальная болезнь птицы: обзор. Патология птиц, 2000; 29 (3): 175-194. https://doi.org/10.1080/03079450050045431
  • • Yuasa, N., Taniguchi, T. и Yoshida, I. Изоляция и некоторые характеристики возбудителя, вызывающего анемию у цыплят. Болезни птиц, 1979; 23: 366-385. https://doi.org/10.2307/1589567

Релевантность антител против вируса куриной анемии

РЕФЕРАТ

Предпосылки Вирус инфекционной анемии кур (CAV) ограничивает функцию множества иммунных компартментов.Смертность от явной инфекции контролируется у бройлеров с помощью пассивной иммунизации, полученной от вакцинированных родительских стад. Поэтому цыплят часто оценивают серологически для определения материнских антител (MDA).

Методы Модель CIA, вызванная передозировкой вакцины. Модель воспроизвела наиболее общие черты болезни. Эта модель была использована для определения роли MDA в защите цыплят. Птенцов тестировали на анти-CAV с помощью ELISA и распределяли по группам на основе уровней антител.В качестве контроля без антител использовали цыплят SPF.

Результаты Более низкие уровни специфических антител, по-видимому, способствовали проникновению вируса в тимус, но уровни вирусов, количество CD4 + и CD8 + , архитектура тимуса и гематокрит сохранялись с помощью MDA, независимо от его уровней.

Заключение Уровни MDA не коррелируют с CIA, но важны для инфекции CAV.

ВАЖНОСТЬ Вакцинация имеет первостепенное значение в производстве бройлеров.Многие вакцины вводятся заводчикам-бройлерам, а не самим бройлерам. Это рентабельно и практично, так как при вакцинации одного родительского стада сотни бройлеров рождаются с материнской защитой. Чтобы оценить качество материнского иммунитета, у цыплят измеряют уровень антител. Для куриной анемии этого недостаточно для подтверждения защиты. Это вирусное заболевание очень распространено, и измерение материнского иммунитета против него определяет, покупать ли цыплят на племенной ферме.В этом исследовании мы подтвердили, что антитела не коррелируют с защитой от заболевания и, следовательно, не должны использоваться в качестве единственного параметра при оценке иммунитета против куриной анемии у бройлеров.

1. Введение

Инфекционная анемия цыплят широко распространена во всем мире в условиях коммерческого производства. Тем не менее, клиническое заболевание бройлеров контролируется с помощью иммунизации заводчиков [1]. Заболевание вызывается вирусом куриной анемии (CAV) из рода Gyrovirus.Инфекция цыплят приводит к репликации вируса в гемоцитобластах и ​​лимфоидных предшественниках, что приводит к потере эритроцитов и лимфоцитов [2,3]. Спустя 21 день после вылупления здоровые птицы становятся практически устойчивыми к клиническим заболеваниям, вызываемым CAV-инфекцией [3]. Поэтому профилактика заболевания сосредоточена в основном на вакцинации заводчиков. Таким образом, ожидается, что антитела могут продуцироваться и передаваться их потомству через желток. Таким образом, считается, что уровни антител у цыплят связаны с защитой от КАВ [4].

Здесь была создана практическая модель болезни куриной анемии, демонстрирующая очевидные клинические и патологические признаки. Используя эту модель, можно было проверить роль материнских антител в защите потомства.

2. Материалы и методы

2.1. Испытания и вызов

Было проведено два испытания. Первое испытание было направлено на стандартизацию испытания передозировки вакцины от куриной анемии. Предыдущая работа продемонстрировала, что цыплята с подавленным иммунитетом обладают устойчивостью к вакцинному вирусу и проявляют симптомы, но простая и воспроизводимая модель куриной анемии еще не создана [5].Здесь птиц заражали через 1 день после вылупления 100-кратной передозировкой CAV-вакцины, вводимой подкожно с помощью иглы G24 (AviPro ™ Thymovac, Elanco, Германия, Lot 07/2019). Известно, что парентеральная инфекция вызывает более выраженное заболевание куриной анемии [6]. Это испытание состояло из следующих групп лечения: 1) не зараженные, материнские антитела (MDA) — цыплята от иммунизированных заводчиков, не зараженные; 2) зараженные, без MDA — SPF цыплята, зараженные; 3) Заражение, MDA — зараженные цыплята от иммунизированных заводчиков.Цыплят вакцинировали в возрасте 12 недель коммерчески доступным продуктом (AviPro ™ Thymovac, Elanco, Германия, Lot 05/2017). Цыплята были получены от заводчиков 34-недельного возраста. Куры-производители содержались в Домелии, Бразилия. Птенцы были выведены в Сальто, Бразилия. Цыплят SPF инкубировали в лаборатории и помещали в изоляторы после вылупления, когда проводили контрольное заражение (птицы SPF от Valo BioMedia do Brasil, Бразилия). Животных оценивали на D1, D7, D14, D21 на наличие антител против CAV, обнаружение вируса в тимусе с помощью кПЦР, иммунофенотип периферической крови и измерение гематокрита.На 7, 14 и 21 день тимусы собирали для гистологической оценки поражений.

Второе испытание было направлено на определение роли материнских антител в защите, вызванной вакцинацией заводчиков. Цыплят вакцинировали в возрасте 13 недель коммерчески доступным продуктом (AviPro ™ Thymovac, Elanco, Германия, Lot 07/2019). Цыплята были получены от заводчиков 36-недельного возраста. Куры-производители содержались в Итапетининге, Бразилия. Птенцы были выведены в Сальто, Бразилия. Цыплят SPF инкубировали в лаборатории и помещали в изоляторы при вылуплении и во время контрольного заражения (птицы SPF от Valo BioMedia do Brasil, Бразилия).Птицы SPF использовались для инфекционного контроля, так как все заводчики вакцинированы от CAV в Южной Бразилии, поэтому их потомство невозможно использовать в качестве контрольной группы в этом исследовании. Цыплят от вакцинированных заводчиков отбирали на высокий или низкий уровень антител после первоначального скрининга с помощью ELISA. Таким образом, экспериментальными группами были: 1) зараженные, с низким содержанием MDA — зараженные цыплята от иммунизированных заводчиков, с низким уровнем анти-CAV антител; 2) Заражение, высокое содержание MDA — зараженные цыплята от иммунизированных заводчиков, высокие уровни анти-CAV антител; 3) Заболевание, цыплята без MDA — SPF, зараженные.Животных оценивали на D1, D3, D14, D21 на наличие антител против CAV, на определение вируса в тимусе с помощью кПЦР и измерение гематокрита. На 14 день тимусы собирали для гистологической оценки поражений.

В обоих испытаниях кровь брали из вены крыла. Gallus gallus были получены от Hendrix Genetics. Органы были собраны обученным персоналом после их удаления путем смещения шейного отдела позвоночника.

Использование животных соответствовало международным стандартам благополучия и было одобрено Комитетом по использованию животных в исследованиях Imunova Análises Biológicas (комитет No 01250.026160 / 2018-37 (586), зарегистрированный Министерством науки и технологий Бразилии). Цыплят содержали в изоляторах с НЕРА-фильтром и бумажной подстилкой. Обработка проводилась через перчатки, которые входили в изоляторы, а материалы, входящие или выходящие из изоляторов, должны были проходить через дезинфицирующий раствор. Вода и еда поставлялись ad libitum . Корм был коммерчески разработан с учетом диетических требований в зависимости от возраста и породы используемых птиц [7]. Вода была получена из коммунального водоснабжения.В каждом изоляторе 1,2 м 2 содержалось по 30 птиц. В каждой точке отбора проб отбирали по восемь животных на группу. Отбор проб на D1 проводился перед помещением животных.

2.2. Лабораторные методы

Иммунофенотипирование проводили методом проточной цитометрии. Протокол без лизиса и без промывания использовался для анализа цельной крови проточной цитометрией, как описано ранее [8]. Анти-куриный CD4 был связан с FITC (клон CT-4). Анти-CD8α связывали с PE (клон CT-8). Анти-куриный CD45 представляли собой SPRD-связанные антитела от Southern Biotechnology.Абсолютный подсчет клеток выполняли с помощью CountBright (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA). Образцы были трехкратно окрашены антителами. Контроли «флуоресценция минус один» использовали для уменьшения спектрального перекрытия. Образцы считывали на цитометре FACScalibur (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ).

Для гистологической оценки поражения тимусы фиксировали в формалине. Залитые парафином срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Обученный ветеринарный патолог отвечал за оценку поражений.Их характеризовали от 0 до 3, включая промежуточные баллы (0,5). Факторами, используемыми для классификации, были различие мозгового вещества / коры, истощение тимоцитов, наличие коагуляционного некроза, количество макрофагов или сегментированных клеток, а также гиперемия или кровотечение.

qPCR для обнаружения вирусов выполняли, как описано ранее. Количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) оценивали путем извлечения ДНК из культур вирусных клеток. Положительность для КАВ была основана на пределе обнаружения метода (1054 БОЕ) [9].Гематокрит определяли капиллярным методом микрогематокрита. Для серологического анализа CAV использовали имеющийся в продаже набор, следуя инструкциям производителя (99-08702, Idexx, Westbrook, ME). Сыворотки тестировали в разведениях 1:10 и 1: 100.

2.3. Статистический анализ

Для статистического анализа каждое животное было экспериментальной единицей. Данные оценивались на основе одного или нескольких показателей и их распределения. Повторные измерения оценивали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с использованием постхактерного теста Тьюки.Непараметрические данные анализировали с помощью теста Краскела-Уоллиса или Манна-Уитни. Значимость была установлена ​​на уровне P <0,10. Графики и статистический анализ выполняли на GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния).

3. Результаты

3.1. Создание вакцино-индуцированной модели куриной анемии

100-кратная передозировка вакцины CAV, вводимая парентерально суточным цыплятам, могла вызвать типичное заболевание куриной анемии. Известно, что инфекция напрямую влияет на количество Т-клеток, но не на В-клетки.Здесь вирус был обнаружен в больших количествах в тимусе у животных без материнского иммунитета. MDA задерживает инфекцию тимуса (Рис. 1A и Рис. 1B) и уменьшает поражения (Рис. 1C). Общее количество лейкоцитов было снижено у зараженных животных без материнского иммунитета, как и CD45 + CD4 CD8 + и CD45 + CD4 + CD8 клеток.

Рис. 1.

Модель заражения куриной анемией соответствовала инфекциям дикого типа. Цыплята, полученные от иммунизированных заводчиков, были серологически положительными в начале испытания, тогда как SPF-птицы были индуцированы продуцированием антител посредством контрольного заражения.Серологическая позитивность изучалась при разведении образцов 1:10 и 1: 100. Антитела SPF не измеряли в D1 (A). Отсутствие материнских антител (MDA) приводит к быстрой и интенсивной инфекции тимуса после заражения, как измерено с помощью количественной ПЦР для CAV. MDA частично предотвратил это (B). Поражения тимуса соответствовали уровням вируса [n = 4 пула по 2 птицы / группа] (C). Типичная способность КАВ влиять на клетки-предшественники, по-видимому, проявляется, о чем свидетельствует снижение общего количества лейкоцитов и подмножеств CD45 + CD4 + CD8- и CD45 + CD4-CD8 + , но не в CD45 + CD4 + CD8 + (D).Точно так же объем упакованных кровью клеток (PCV) был уменьшен после заражения (E). Наконец, заражение отрицательно сказалось на массе тела птицы в отсутствие МДА, но не в его присутствии (F). Статистический анализ с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с использованием критерия Тьюки posthoc ( P <0,05, если не указано иное), за исключением оценок гистологии (критерий Краскала-Уоллиса). Существенные различия на данную дату обозначаются разными буквами цвета соответствующей группы. Существенные различия на протяжении всего эксперимента (основной лечебный эффект) обозначены разными буквами рядом с легендой каждого графика.График КПЦР показывает медианы ± диапазоны. График гистологии указывает медианное значение, а каждая точка представляет животное. Остальные графики показывают среднее значение ± стандартное отклонение.

Интересно, что заражение не затронуло трехкратно окрашенные клетки CD45 + CD4 + CD8 + (фиг. 1D). На объем упакованных эритроцитов клеток аналогичным образом повлияла передозировка вакцины (рис. 1E). Наконец, экспериментальная инфекция снизила общую массу тела цыплят без материнского иммунитета на 21 день после вылупления (рис.1F).

3.2. Уровни CAV-антител у цыплят определяют раннюю распространенность вируса, но не патогенез.

Установленную модель куриной анемии использовали для определения роли материнских антител в защите, предоставляемой цыплятам после вакцинации родительского стада. Для этого вылупившихся птенцов отделяли на основе их материнских уровней антител (рис. 2А). У цыплят с высоким уровнем МДА были более низкие уровни распространенности КАВ тимуса на 4 и 14 дни после вылупления (рис. 2В). Тем не менее, независимо от уровней МДА, только на 21 день цыплята с МДА достигли таких же уровней инфекции КАВ, как у птиц SPF (рис.2Б). Это отразилось также на более низких показателях поражений тимуса у цыплят, получивших материнский иммунитет, независимо от уровня антител (рис. 2С). Кроме того, объем упакованных эритроцитами клеток сохранялся у птиц с MDA, независимо от уровня, тогда как у птиц SPF наблюдалось заметное снижение его уровней (рис. 2D).

Рис. 2.

Защита от куриной анемии не зависит от материнских антител (MDA). Суточных цыплят разделяли в изоляторы на основании их положительности по антителам и уровней CAV (A).Птицы SPF использовали в качестве контроля без МДА. Всем животным вводили CAV. Более высокие уровни материнских антител сдерживали частоту КАВ в тимусе, но общие вирусные нагрузки были одинаковыми у цыплят от вакцинированных заводчиков, независимо от MDA (B). Соответственно, поражения тимуса (C) и объем эритроцитов (D) сохранялись при наличии материнского иммунитета, независимо от уровней антител против CAV. Статистический анализ с помощью двухфакторного дисперсионного анализа с использованием posthoc-критерия Тьюки ( P <0.05, если не указано иное), за исключением баллов по гистологии (тест Краскела-Уоллиса). Существенные различия на данную дату обозначаются разными буквами цвета соответствующей группы. Существенные различия на протяжении всего эксперимента (основной лечебный эффект) обозначены разными буквами рядом с легендой каждого графика. График КПЦР показывает медианы ± диапазоны. График гистологии указывает медианное значение, а каждая точка представляет животное. Остальные графики показывают среднее значение ± стандартное отклонение.

4.Обсуждение

Вирус анемии цыплят (CAV) — распространенный патоген в коммерческих птицеводческих хозяйствах [1,10]. Вирус поражает клетки-предшественники в костном мозге и тимусе, влияя, среди прочего, на выработку Т-лимфоцитов и эритроцитов. Возникновение болезни после инфекции КАВ в основном ограничивается первыми двумя неделями после вылупления [3]. Поэтому стало нормой, что иммунитет передается не цыплятам путем прямой вакцинации этих птиц, а их заводчиков [1].Из-за этой практики уровни материнских антител (MDA) у суточных цыплят часто рассматриваются как идеальные корреляты защиты [4]. Результаты этого исследования показывают, что уровни антител к CAV у цыплят не связаны с восприимчивостью к заболеванию, хотя может быть корреляция с распространением вируса.

Модель заражения была создана для болезни КАВ, основанная на передозировке живой вакцины. Использование экспериментальных моделей заражения актуально, поскольку оно позволяет воспроизводить испытания с воспроизводимостью.Мы также предлагаем использовать передозировку живой вакцины в качестве модели заражения CAV из-за дополнительного преимущества, позволяющего лабораториям, не имеющим дорогостоящей вирусологической инфраструктуры, изучать болезнь. Модель смогла воспроизвести эффекты вирулентных инфекций CAV у незащищенных цыплят. Во время инфекции вирус интенсивно локализуется в коре и кортикомедуллярном соединении тимуса, вызывая потерю клеток CD4 + и CD8 + и Т-клеточное подавление иммунитета [11,12].У зараженных неиммунных цыплят индуцировались лейкопения (с потерей клеток CD4 + и CD8 + ), анемия, поражения тимуса и снижение прибавки в весе. Вирус может быть обнаружен с помощью количественной ПЦР в тимусе. У пассивно иммунизированных животных эффекты заражения уменьшились, в то время как отрицательный контроль оставался без изменений. Таким образом, экспериментальная модель живой вакцины может воспроизводить эффекты CAV-инфекции дикого типа и может быть воспроизведена в лабораториях, не обладающих вирусологической инфраструктурой.

Модель заражения, индуцированного вакциной, использовали для определения эффекта материнских антител на защиту потомства. Суточные цыплята были сгруппированы по их уровням анти-CAV. Как и ожидалось, птицы SPF, которые не обладают материнским иммунитетом к CAV, были очень восприимчивы к заражению, быстро заражались вирусом и демонстрировали анемию и нарушение иммунитета. Интересно, что все цыплята, полученные от вакцинированных заводчиков, были постоянно защищены от заражения, независимо от уровней материнских антител.Более низкие уровни MDA увеличивали раннюю (D4 и D14 после вылупления и заражения) распространенность CAV, но это не приводило к более высоким средним уровням вируса или к потере иммунных клеток и эритроцитов. Вирусная нагрузка в иммунных органах коррелирует со снижением количества лимфоцитов в тканях [6], как здесь наблюдается при количественной оценке вируса в тимусе с помощью КПЦР, поражений тимуса и количества клеток CD4 + и CD8 + .

В заключение, эти данные подтверждают, что материнский иммунитет имеет решающее значение для защиты цыплят от заболевания CAV, но что он не обязательно опосредуется CAV-специфическими антителами [6].В защите потомства посредством материнского иммунитета могут быть задействованы и другие механизмы: 1) Заводчики также передают своим потомкам высокие уровни естественных антител (NAb). Это важные компоненты врожденного распознавания патогенов в отсутствие предшествующей стимуляции антигеном [13]. Иммунизация изменяет репертуар NAb, хотя и не конкретно против антигена, как обычно предполагается при вакцинации, из-за неспецифической природы NAb [14]. Таким образом, NAbs могут частично отвечать за повышенную устойчивость к CAV цыплят с материнским иммунитетом; 2) CAV-инфекция вызывает иммунную супрессию за счет дисрегуляции TCR, а эффекторы иммунных клеток материнского происхождения могут быть частью защиты, обеспечиваемой заводчиками своему потомству [15]; 3) Материнское влияние на иммунитет цыплят также может быть опосредовано гормонами, проходящими через яйцо [16].Это, а также очевидное различие в генетическом фоне, возможно, объясняют некоторые различия между SPF и коммерческими птицами [17].

Вклад авторов

M.I., B.C.B.B., F.R., and L.F.C. несли ответственность за испытания. M.I., B.C.B.B., L.F.C., L.D.B. и L.C.A. разработал эксперимент. B.C.B.B. подготовил рукопись, и все авторы несли ответственность за ее исправление и утверждение.

Декларация о конкурирующем интересе

L.D.B. является аффилированным лицом компании Elanco, L.C.A. и M.A.P.A являются аффилированными лицами Hendrix, спонсировавшего это исследование. M.I., F.R., B.C.B.B. и L.F.C. являются аффилированными с Imunova Análises Biológicas, которая предоставляет услуги компаниям Elanco и Hendrix.

Финансирование

Эта работа финансировалась Hendrix Genetics и Elanco.

Аббревиатуры

CAV
вирус куриной анемии
D
дней
MDA
материнские антитела
PFU
бляшкообразующая единица
SPR49 полимераза 908
без специфических патогенов

Ссылки

  1. [1].↵
  2. [2] .↵

    Щат К.А. Вирус куриной анемии. TT-вирусы, Springer; 2009, стр. 151–83.

  3. [3] .↵
  4. [4] .↵
  5. [5] .↵

    Вазирий А. Вакцинация против вируса инфекционной анемии цыплят вызывает иммунные нарушения и устойчивость вируса у инфицированных вирусом инфекционной бурсальной болезни молодых цыплят. Université de Montréal, 2011.

  6. [6] .↵
  7. [7] .↵

    Rostagno HS, Albino LFT, Donzele JL, Gomes PC, Oliveira RF de, Lopes DC, et al.Tabelas brasileiras para aves e suínos: composição de alimentos e exigências nutricionais. 2-е изд. Висоза: UFV; 2005.

  8. [8] .↵
  9. [9] .↵
  10. [10] .↵
  11. [11] .↵
  12. [12] .↵
  13. [13] .↵
  14. [14 ] .↵
  15. [15].
  16. [16] .↵
  17. [17] .↵

Заболевания, предположительно связанные с инфекцией вируса анемии цыплят, у ремонтных молодок в возрасте от 11 до 14 недель из восточной Японии : история болезни

  • Флетчер ДЕЛЬ ВАЛЛЕ

    Контроль качества продуктов птицеводства, 125-7 Дайва Дакеонсен, Нихонмацу-ши, Фукусима 964-0062, Японское отделение ветеринарных наук, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531 , Япония

  • Шервин КАМБА

    Контроль качества продуктов птицеводства, 125-7 Дайва Дакеонсен, Нихонмацу-ши, Фукусима 964-0062, Японское отделение ветеринарных наук, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531 , Япония

  • Деннис УМАЛИ

    Отдел ветеринарии, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531, Японский департамент ветеринарных клинических наук, Колледж ветеринарной медицины Филиппинского университета Лос-Баньос, Колледж , Laguna 4031, Филиппины

  • Кадзутоши ШИРОТА

    Контроль качества продуктов птицеводства, 125-7 Daiwa Dakeonsen, Nihonmatsu-shi, Fukushima 964-0062, Japan

  • Кадзуми САСАЙ

    Отдел ветеринарии, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531, Япония

  • Hiromitsu KATOH

    Контроль качества продуктов птицеводства, 125-7 Дайва Дакеонсен, Нихонмацу-ши, Фукусима 964-0062, Японское отделение ветеринарных наук, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531 , Япония, Департамент ветеринарных клинических наук, Колледж ветеринарной медицины, Филиппинский университет, Лос-Баньос, колледж, Лагуна 4031, Филиппины

  • Томоко ТАДЗИМА

    Отдел ветеринарии, Высшая школа жизни и биологических наук, Университет префектуры Осака, 1-58 Ринку-орайкита, Идзумисано, Осака 598-8531, Япония

  • .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *